《边做边学 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳》导学案2.docVIP

《边做边学 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳》导学案 课前自主导学 知识1 离心沉降法和薄膜透析法分离蛋白质 1.细胞中蛋白质的释放 在提取蛋白质时，可以采用研磨与超声波结合的方法将生物组织或细胞完全破碎，使蛋白质从细胞中释放出来，并使其溶解在适当的抽提液中。 2．抽提液的选择 要根据蛋白质的特性而定，一般酸性蛋白质用偏碱性溶液抽提，碱性蛋白质用偏酸性溶液抽提，脂蛋白等则可用有机溶剂抽提。 3．离心沉降法分离蛋白质 通过控制离心速度，使分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层，从而达到分离出不同种类蛋白质的目的。 4．薄膜透析法分离蛋白质 利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性，使蛋白质与其他小分子化合物分离开的纯化蛋白质的方法。 知识2 凝胶色谱法分离蛋白质 1.凝胶色谱法的概念 是根据蛋白质分子的大小，对其进行有效分离的方法。 2．凝胶 (1)组成：由胶体溶液凝结而成的固体物质。 (2)成分：由葡聚糖、琼脂糖等多糖类化合物。 (3)结构：小球体内部具有很细微的多孔网状结构。 3．分离蛋白质的原理 ①大分子蛋白质不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙移动，洗脱路程较短，移动速度较快，最先流出柱外。 ②小分子蛋白质可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构，洗脱路程较长，移动速度缓慢，以致较长时间流出柱外。 知识3 蒸馏 1.蒸馏的概念 将液体加热至沸腾，使液体变为蒸气，然后使蒸气冷却再凝结为液体，这两个过程联合操作称为蒸馏。 2．蒸馏分离物质的原理 蒸馏可以将易挥发和不易挥发的物质分离开来，也可将液体混合物中沸点不同的物质分离开来。 知识4 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 实验步骤 操作方法 平悬薄膜 将点样端平贴在电泳槽负极支架的“滤纸桥”上，有记号的一面朝上，另一端平贴于正极，呈绷直状态 实施电泳 盖上电泳槽盖，电泳60～90 min 染色 取下薄膜，放入染色液中浸泡5～10 min 漂洗 取出薄膜，在漂洗液中漂洗数次，直至蛋白质区底色脱净为止 脱色 用滤纸压平并吸干薄膜后，再浸入透明液中约5 min，取出后平贴于玻璃板上，待完全干燥后便成透明膜图谱，可长期保存 知识5 提取橘皮中的芳香油 1.橘皮芳香油具有诱人的橘香味，其主要成分是柠檬烯。 2．水蒸气蒸馏法 (1)适用范围：适用于能随水蒸气蒸馏而不被破坏的物质成分的提取。 (2)操作步骤 将橘皮切碎与适量的水放入蒸馏瓶―→点燃酒精灯，实施蒸馏―→用锥形瓶收集液体―→用分液漏斗分离芳香油 3．芳香油的提取方法 提取植物芳香油一般根据植物原料的特点确定具体的提取方法。 (1)对玫瑰油、薄荷油等是挥发性较强，能随水蒸气蒸发的植物芳香油通常利用蒸馏法提取。 (2)柠檬油、甜橙油易受机械压力作用而直接榨出，一般采用压榨法制得。 (3)如橘皮芳香油既可采用蒸馏法提取，也可采用压榨法制得。 (4)如制取茉莉浸膏还可采用萃取法制取。 正误判断 1．离心沉降法和薄膜透析法分离蛋白质的原理是一样的。(×) 【提示】　不一样，前者是离心沉降，后者是根据半透膜的透性。 2．凝胶色谱法是根据蛋白质分子的大小而对其进行有效分离的方法。(√) 3．醋酸纤维薄膜电泳是采用滤纸为支持物的电泳方法。(×) 【提示】　采用醋酸纤维薄膜为支持物。 4．振荡处理后，芳香油位于分液漏斗中液体的下部。(×) 【提示】　上部。 课堂互动探究 探究1 蛋白质分子在凝胶中的运动情况分析 【问题导思】　 ①凝胶色谱法分离蛋白质的原理是什么？ ②蛋白质分子的大小不同在凝胶中的运动情况有什么不同？ 相对分子质量大 相对分子质量小 直径大小 大于凝胶颗粒空隙直径 小于凝胶颗粒空隙直径 运动方式 垂直向下运动 不规则的扩散运动 运动速度 较快 较慢 运动路程 较短 较长 洗脱次序 先从凝胶柱中洗脱出来 后从凝胶柱中洗脱出来 名师点拨　 凝胶色谱的原理是相对分子质量小的蛋白质进入凝胶孔道，路程长，移动速度慢；而相对分子质量大的蛋白质在凝胶外部移动，路程短，移动快，这种现象又称分子筛效应。 例1　用凝胶色谱法分离蛋白质的实验中，相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为图中哪一个(　　) 【思维导图】　 【精讲精析】　如题图所示，相对分子质量较大的蛋白质容易通过凝胶间隙，先被洗脱出来；相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部，后被洗脱出来。答案为B。 【答案】　B 变式训练 1．凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是(　　) A．根据蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小 B．根据蛋白质相对分子质量的大小 C．根据蛋白所带电荷的多少 D．根据蛋白质溶解度的大小 【解析】　凝胶色谱法是根据蛋白质相对分子质量的大小分离蛋白质的一种方法。 【答案】　B 探究2 醋酸纤维薄膜电