第03课 痰涂片镜检操作规范.ppt

一、标本的来源与收集 初诊时留取标本数量 以三份标本的阳性检出例数作为100％，留取一份标本的阳性检出例数占全部阳性例数的80％，留取两份标本的阳性检出例数占全部阳性检出例数的95％。 不同痰液涂片阳性率表（仅供示例） 性质 例数 阳性数 阳性率  干酪样痰 55 36 65.5%  血性痰 46 16 34.8%  粘液性痰 529 56 10.6% 水样痰 92 7 7.6% 二、痰标本制作前的准备 （一）、脱脂玻片（95%乙醇浸泡） （二）、竹签 （三）、痰涂片模板 脱脂玻片 95%的乙醇浸泡后晾干备用 痰涂片摸板 10mm×20mm的椭圆 于玻片右2/3的中心 使用铅笔在磨砂面上标记 三、痰涂片的制作 标本静置消毒 确保标本编号一致（初诊3个、治疗或随访2个） 轻轻打开盖子 挑取标本中脓样或可疑部分 按照模板，从椭圆形中心开始，从里→外→里，反复多次涂抹，稍晾，待痰膜水分挥发部分，视痰膜厚薄程度，再次挑取适量痰液，涂至满意为止（循环覆盖） 水样痰的涂法 可用反复多次覆盖法，实在挑取不到什么东西，先用吸管吸取适量标本（标本一定要静置），稍晾（时间较长），再用竹签涂抹均匀致满意 涂抹完的标本自然干燥后，再火焰固定（5秒内来回4次） 四、抗酸染色原理 初染时碱性复红与细胞壁的分枝菌酸结合 脱色时脱色液不能将碱性复红从抗酸菌细胞壁上洗脱 抗酸菌的染色保持初染的颜色 复染提供背景对比 五、注意事项 加热固定后待彻底冷却 染液覆盖整个痰膜 染架要平衡 玻片间保持一定距离 冲洗用背面冲洗法 脱色时人不能离开 背面冲洗 脱色 讨论（1）：痰盒正确否？right? 那一种可以接受？ 讨论（2）滴加染液和加热 讨论（2）滴加染液和加热 讨论（2）滴加染液和加热 附件（仅供参考） 六、评价痰涂片 位置 大小（10mm×20mm） 厚薄（刚好透过报纸的5号字体，镜下每个视野20个左右细胞） 染色（肉眼看天蓝色,无红/紫色斑块） 脱落（＜10%痰膜面积） 镜检：在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其它细菌和细胞呈蓝色 涂片结果报告标准(萋－尼氏抗酸菌染色法)阴性 300 视野 0条报告菌数 300 视野 1～8条 阳性1＋ 100视野 3～9条 阳性2＋ 10视野 1～9条阳性3＋ 每视野 1～9条阳性4＋ 每视野 10条 如何进行痰涂片质量控制 痰标本收集: 标本性状的控制（加强于医生沟通） 3份痰标本（1即时痰、2夜间痰、3晨间痰） 痰标本保存（不能当日检查的保存于冰箱防液化） 染液控制 用之前过滤一下（一周一次） 如何进行痰涂片质量控制 室内质控 抽查复检当日10%的涂片，自查或互查 选取结果可疑的涂片复查，尤其是只看到一条的或只在一处视野看到细菌 选择痰阳病人有阴性结果的涂片 记录结果1-8条涂片 玻片的保存 使用显微镜附带的镜油，或者是购买的镜油（immersion oil）,而不是香柏油（cedar oil）,则不需使用二甲苯，直接使用镜头纸擦拭即可 干燥后的玻片，按实验室序号及涂片编号放置在玻片盒中，存放在阴凉干燥环境中。处于潮湿炎热的环境中抗酸菌易于褪色。 痰细菌学检查工作经常被忽视 人员不稳定，培训不足 实验室设备不足，更新较慢 不注意总结与提高 如何提高痰细菌学检查在专业人员心目中地位 加强自身专业技术素质 保证痰细菌学检查工作质量 应用标准、统一的技术规范 注意积累、总结工作经验 不断加强实验室的规范化建设（人员配备、实验室设备、安全操作、质量控制） 质控范围 评价标准 痰片镜检：阳性片符合率≥98%, 阴性片符合率≥96% 制片质量：痰细胞，痰膜面积、厚薄、脱落合格率≥90%，染色合格率≥95% * 痰涂片： 使用竹/木签的毛茬段，挑取痰标本中黄色脓性部分 金属接种环 (内径3mm) 也可用于涂片 在玻片上均匀涂抹痰标本，重复螺旋轨迹，涂抹痰膜大小1×2厘米。涂抹结束后，将竹木签放在废弃物桶里，每涂一张玻片抹使用一个新的竹木签. 如果使用金属环，再次涂抹前在装有砂子的酒精瓶里搅动几下，以除去残留在其上的痰标本 ?然后在火焰上加热烧红，冷却后使用 涂抹后未干的痰膜容易产生气溶胶。在自然干燥期