绞股蓝鲨烯环氧酶基因的克隆及序列分析.pdf

西北植物学报 ，2010，30(8)：1520—1526 ActaBot．Borea1．-Occident．Sin． 文章编号 ：1000—4025(2010)08一l520—07 绞股蓝鲨烯环氧酶基因的克隆与序列分析 蒋军富，李雄英，吴耀生 ，罗 育，周 娟，赵瑞强 (广西医科大学 生物化学与分子生物学教研室 ，南宁 530021) 摘 要：根据 已报道植物鲨烯环氧酶(squaleneepoxidase，SE)基因cDNA序列的保守区域设计引物 ，利用 RT-PCR 和RACE技术 ，对绞股蓝 SE基因进行克隆及序列分析 。结果表 明，绞股蓝 SE基 因cDNA全长为 1818bp，编码一 个 由525个氨基酸残基组成 的多肽。绞股蓝 SE基因编码 的氨基酸序列 中含有 52．4 的非极性疏水性氨基酸 ， 26．1 极性 中性氨基酸 ，9．0 酸性氨基酸 ，12．6Vo碱性氨基酸 。Blast结果显示 ，绞股蓝 SE基 因核苷酸序列与其 他已报道 的植物 SE基因相似性为 73 ～82 ，推导的氨基酸序列相似性为 63．2 ～79．4 。SE氨基酸序列进 化分析发现 ，绞股蓝SE与绿珊瑚 、拟南芥亲缘关系较近 。 关键词：绞股蓝；鲨烯环氧酶；RACE；克隆；序列分析 中图分类号 ：Q789 文献标识码 ：A CloningandSequenceAnalysisofSqualeneEpoxidase Genefrom Gynostemmapentaphyllum JIANGJun—fu，LIXiong—ying，WU Yao—sheng ，LUO Yu，ZH0U Juan，ZHAO Rui—qiang (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，GuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China) Abstract．Degenerateprimersdesignedfrom theconservativedomainofsqualeneepoxidase(SE)inplants wereusedtoamplifytheSE fragmentsfrom cDNA ofGynostemmapentaphyllum byRT—PCR andRACE technology．Thefull—lengthcDNA ofSE from G．pentaphyllum had1818bpwith an open reading frame encoding525am inoacidsofprotein．Thereare52．4 ofnonpolarityhydrophobic，26．1 ofpolarityneu- tral，9．0 ofacidic，3Swellas12．6 ofalkalineaminoacidresiduesintheSE polypeptidechain．There— suitsofhomologousanalysisinGenBankdemonstratedthatthesequenceshad73 ～82 similarityonthe nucleotidesequenceand63．2 ～ 79．4 similarityonthededucedaminoacidsequence．Furthermore，phy— logenieanalysisontheaminoacidsequenceofSE from G．pentaphyllum withthoseofotherplantsshowed thatG．pentaphyllum wascloselyrelatedtoEuphorbiatirucalliandArabidopsisthaliana． Keywords：Gynostemmapentaphyllum ；squaleneepoxidase；RACE；cloning；sequenceanalysis 三萜皂苷 (triterpenoidsaponin)是一类重要 的 降血糖 、降血脂等多种生物活性 ，具有重要的药用 中草药有效成分 ，常见于绞股蓝 (Gynostem