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专题一 基因工程 来源：原核生物 作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列（反向对称重复排列），切割特定切点（磷酸二酯键）。 结果：产生黏性未端（碱基互补配对）或平末端。 三、基因工程操作的基本步骤 目的基因：主要指编码蛋白质的结构基因 ⑴分子水平检测： ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因： 方法——DNA分子杂交(探针与基因组DNA) ②检测目的基因是否转录出了mRNA： 方法——分子杂交（探针与生物体mRNA） ③检测目的基因是否翻译成蛋白质： 方法——抗原—抗体杂交(生物中蛋白质与抗体) （10福建卷）32．[生物—现代生物科技专题](10分)红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(rhEPO）期间要生产流程如右图 （1）图中①所指的是 技术。 （2）图中②所指的物质是 ，③所指的物质是 。 （3）培养重组CHO 细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞严物积累对细胞自身造成危害，应定期更换 。 （4）检测 rhEPO外活性需用抗rhEPO单克隆抗体。分泌单克隆抗体的 细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成 （10天津卷）Ⅰ.（14分）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性金银，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。 据图回答： （1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。 （2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是 （填字母代号）。 A.启动子 B. tetR C.复制原点 D. ampR （3）过程①可采用的操作方法是 （填字母代号）。 A.农杆菌转化 B. 大肠杆菌转化 C.显微注射 D. 细胞融合 （4）过程②可采用的生物技术是 。 （5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的 性。 （6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 （填字母代号）技术。 A.核酸分子杂交 B. 基因序列分析 C.抗原—抗体杂交 D. PCR * * 基因工程的基本工具 1、限制性核酸内切酶----“分子手术刀” 作用：连接双链的DNA片段，形成磷酸二酯键。 种类： E·coli DNA连接酶（黏性末端）-大肠杆菌 T4 DNA连接酶（黏性末端、平末端）- T4噬菌体 2、DNA连接酶----“分子缝合针” 3、运载体-----“分子运输车” ①具有1至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入 ②在受体细胞中能复制并稳定保存 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择 作用：将外源基因送入受体细胞。 常用载体：拟核外环状DNA （质粒） 其他种类：λ噬菌体衍生物和动植物病毒 条件： 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 1、目的基因的获取 ①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增 ③人工合成 获取方法： 基因组文库 部分基因文库（cDNA文库） 基因文库的构建方法 ①鸟枪法： 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接 载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (直接分离法) 从基因文库中获取目的基因 ②反转录法： 目的基因的mRNA 单链DNA C DNA 反转录酶 合成 基因文库的构建方法 双链DNA (目的基因) 真核细胞的基因结构 非编码区：和原核生物的作用一样 编码区： （间隔的，不连续的） 基因 内含子:不能够编码蛋白质的序列， 但能转录为信使RNA 外显子:能够编码蛋白质的序列 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶结合位点 内含子 外显子 编码区上游 编码区下游 外显子1 外显子2 外显子3 外显子4 外显子5 启动子 终止子 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶结合位点