05 第五章RNA生物合成 (转录).ppt

第五章 RNA生物合成 （RNA Biosynthesis） （转录） 转录：在RNA聚合酶的催化下，以一段DNA链为模板合成RNA，从而将DNA所携带的遗传信息传递给RNA的过程。 rRNA tRNA mRNA snRNA HnRNA 是指以双链DNA中的一条链作为模板进行转录，从而将遗传信息由DNA传递给RNA。 对于不同的基因来说，其转录信息可以存在于两条不同的DNA链上。 能够转录RNA的那条DNA链称为模板链，也称作有意义链或Watson链。 而与之互补的另一条DNA链称为编码链，也称为反义链或Crick链。 RNA转录合成时，以DNA作为模板，在RNA聚合酶的催化下，连续合成一段RNA链。 RNA转录合成时，只能向一个方向进行聚合，所依赖的模板DNA链的方向为3→5，而RNA链的合成方向为5→3。 RNA转录合成时，只能以DNA分子中的某一段作为模板，故存在特定的起始位点和特定的终止位点。 特定起始点和特定终止点之间的DNA链构成一个转录单位，通常由转录区和有关的调节顺序构成。 这是一种不同于引物酶的依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP）。 该酶在单链DNA模板以及四种核糖核苷酸存在的条件下，不需要引物，即可从5→3聚合RNA。 原核生物中的RNA聚合酶全酶由五个亚基构成，即?2???。 ?亚基与转录起始点的识别有关，在转录合成开始后被释放；余下的部分（?2??）被称为核心酶，与RNA链的聚合有关。 真核生物中的RNA聚合酶可按其对?-鹅膏蕈碱的敏感性而分为三种，它们均由10～12个大小不同的亚基所组成，结构非常复杂，其功能也不同。 在真核生物中，转录的起始过程较为复杂。现已发现数百种蛋白因子与RNA转录合成有关，这些蛋白因子被统称为反式作用因子。 在反式作用因子中，直接或间接参与转录起始复合体的形成的蛋白因子被称为转录因子（TF）。 不同的RNA聚合酶存在相应的转录因子，如与RNA聚合酶Ⅱ相关的转录因子包括 TFⅡA，TFⅡB，TFⅡD，TFⅡE，TFⅡF，TFⅡH等。 原核生物中的终止因子ρ蛋白是一种六聚体的蛋白质，亚基的分子量为50kd。 该蛋白因子能识别转录终止信号，并与RNA紧密结合，导致RNA的释放。  1. 转录起始的上游区段： 真核生物的转录起始点上游-25bp区也存在一段富含TA的顺序，被称为Hogness盒或TATA盒，通常认为是启动子的核心序列。 除此之外，在真核生物中还可见到其他带共性的序列，如CAAT盒及GC盒等。 真核生物转录起始时，首先由TFⅡD的TBP亚基识别并结合TATA盒，然后在其他转录因子的配合下，与RNA聚合酶Ⅱ组装形成转录起始前复合物(PIC)。 RNA聚合酶Ⅱ催化第一个磷酸二酯键形成。 RNA聚合酶Ⅱ的羧基末端结构域（CTD）被磷酸化修饰，大部分转录因子脱离，聚合酶向下游移动延伸RNA链。 （二）转录延长 真核生物转录延长过程与原核生物类似，但由于存在核小体的高级结构，故在转录延长过程中可观察到核小体移位和解聚现象。 二、转录延长 （三）转录终止 真核生物转录终止与转录后修饰，即poly A尾巴结构的添加密切相关。 在poly A修饰位点的下游存在一组共同序列AATAAA和GTGTGT……，为转录终止的识别修饰位点。 在转录越过修饰点后，RNA链在修饰点处被切断，随即进行加帽和加尾修饰。 真核生物RNA的转录终止 1．加帽(adding cap)： 在mRNA的5-端加上m7GTP的结构。此过程发生在细胞核内，即HnRNA即可进行加帽。 加工过程首先是在磷酸酶的作用下，将5-端的磷酸基水解，然后再加上鸟苷三磷酸，形成GpppN的结构，再对G进行甲基化。 2．加尾(adding tail)： 这一过程也是细胞核内完成，首先由核酸外切酶切去3-端一些过剩的核苷酸，然后再加入polyA。 polyA结构与mRNA的半寿期有关。 （二）mRNA的剪接 核内带有外显子和内含子编码序列的初级RNA转录产物称为杂化核RNA (hnRNA)。hnRNA经剪接加工除去内含子编码序列并将外显子编码序列连接起来才能形成成熟mRNA。 snRNA为核内小RNA，富含尿嘧啶，故以U作分类和命名，如U1、U2等。snRNA与核内蛋白质组装形成小核蛋白体（snRNP），参与hnRNA的剪接加工。 3. hnRNA的剪接过程： ① snRNP与hnRNA结合成为剪接体。 ② 剪接体结构调整，U2和U6形成催化中心，发生转酯反应。 ? RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是