九种单核细胞增生性李斯特菌检测技术效果比较及评价.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（６）：８４９２ 九种单核细胞增生性李斯特菌检测技术 效果比较及评价 １，２ ３ １ ２ ４ １ ５ 刘雅莉 　刘　芳 　韩舜愈 　刘　箐 　孙志博 　夏俊芳 　朱小清 （１甘肃农业大学食品科学与工程学院　兰州　７３００７０　２上海理工大学医疗器械与食品学院　上海　２０００９３） （３甘肃出入境检验检疫局国际旅行卫生保健中心　 兰州　７３００２０　４兰州大学基础医学院　兰州　７３００００） （５甘肃出入境检验检疫局　兰州　７３００２０） 摘要　采用传统生物学方法、显色培养基方法、自制三抗体夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒（ＴＡＳＥＬＩＳＡ）、基因 组直接 ＰＣＲ（ＤＮＡＤｉｒｅｃｔＰＣＲ）、菌裂解直接 ＰＣＲ（ＢａｃｔｅｒｉｕｍＤｉｒｅｃｔＰＣＲ）、免疫捕捉 ＰＣＲ（ＩＣ ＰＣＲ）、生物ＰＣＲ（ＢｉｏＰＣＲ）、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ染料实时荧光ＰＣＲ（ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ）、探针实 时荧光ＰＣＲ（ＴａｑＭａｎＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ）检测纯菌液及模拟带菌食品中的单核细胞增生性李斯特菌 （Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，ＬＭ）。结果表明：传统生物学培养方法出现假阳性；ＴＡＳＥＬＩＳＡ、ＤＮＡ ６ ２ ５ ４ ＤｉｒｅｃｔＰＣＲ、ＢａｃｔｅｒｉｕｍＤｉｒｅｃｔＰＣＲ、ＩＣＰＣＲ最低检测限分别为１０、１０、１０、１０ＣＦＵ／ｍｌ；显色培养 ２ 基、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ灵敏度达１０ＣＦＵ／ｍｌ；ＢｉｏＰＣＲ、ＴａｑＭａｎＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测灵敏度 １ 最高，均为１０ＣＦＵ／ｍｌ。显色培养基、ＴＡＳＥＬＩＳＡ操作简单，适合大量样品的初检；ＩＣＰＣＲ具有灵 敏、特异、快速、经济的优点，特别适合大体积样品中微量病原的检测；ＢｉｏＰＣＲ、ＴａｑＭａｎＲｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ灵敏度高、特异性好，适合阳性样品的复检以及科研使用。 关键词　单核细胞增生性李斯特菌　三抗体夹心ＥＬＩＳＡ　免疫捕捉ＰＣＲ　生物ＰＣＲ　实时荧光 定量ＰＣＲ 中图分类号　Ｑ８１９ ［１０１１］ ［１２］ ［１３］ 　　单核细胞增生李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ， 芯片 、变性高效液相色谱 、色谱质谱分析 ＬＭ）是一种短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌， 等。但这些检测技术有些未列入检测标准，有些技术 是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是唯一对人致 本身存在缺陷，有些适用范围有限，为了进一步明确这 病的、典型的胞内寄生菌，可以导致严重的人畜共患传 些方法的优劣，指导技术人员进行检测方法的选择，从 染病，如脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多等症状。 而提高检出率、增加检测的敏感性和特异性、缩短检测 １９８８年，世界卫生组织 （ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ， 周期、减少检测成本，研究结合本实验室近年的研究成 ＷＨＯ）发表“食源性李斯特菌病劝告书”，指导全世界 果，用九种方法检测纯菌液及牛奶、果汁、酸奶、雪糕、 各国如何预防李斯特菌污染和中毒；自此，ＬＭ成为新 香肠、生猪肉六种模拟带菌食品中的ＬＭ，比较并评价 的重要的食源性疾病病原菌，ＷＨＯ将其与大肠杆菌 了各技术的优缺点，明确了不同技术的适用范围。 Ｏ１５７∶Ｈ１５７、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌并列为２０ １　材料与方法 世纪９０年代四大食源性致病菌。目前，针对 ＬＭ的检