TripleTOF质谱技术在生物制药研究领域应用.pdf

AB SCIEX公司生物制药研究解决方案 - TripleTOF质谱技术在生物制药研究领域应用 罗继 上海亚太应用支持中心，2013. 5 主要内容 生物制药简介及其对质谱的要求 TripleTOF质谱技术简介 TripleTOF质谱技术在生物制药领域中的应用 – 单克隆抗体蛋白完整分子量分析 – 单克隆抗体蛋白肽图及常见修饰分析 – 单克隆抗体糖基化修饰分析 2 © 2011 AB SCIEX 生物制药研究概况 什么是生物制药 狭义上来说生物只要就是一种重组DNA制药技术 – 蛋白或者多肽在细菌或真核生物体内克隆表达， – 杂交瘤中生产单克隆抗体 – 生物学方法生产核酸 (非化学合成方法) 将基因克隆入大肠杆菌生产人工胰岛素属于生物制药，但用化 学合成方法生产多肽则不属于生物制药的范畴  学术上任何利用生物分子来制药都可以成为生物制药 4 © 2011 AB SCIEX 质谱在生物制药领域的作用 基础篇  完整蛋白分析，去卷积测定分子量是每天必做的工作 肽图分析 翻译后修饰分析  非常规生物学修饰分析 (如氧化，去酰胺化)  杂质表征  完成前期工作后，确定标准以作为样品间相互比较 5 © 2011 AB SCIEX 质谱在生物制药领域的作用 高级篇  更深层次的糖基化分析 – 糖基化位点及糖型分析 – 对生物学功能及免疫应答的影响I 序列变体 – 越来越受重视 – 改进分析方法以找到更多变体的种类  宿主蛋白分析 6 © 2011 AB SCIEX AB SCIEX TripleTOF质谱技术简介 + AB SCIEX TripleTOF™ 5600 系统 • 灵敏度最高 – 具有TripleQuad 的灵敏度，MS和MSMS模式 • SmartSpeed™ 100 Hz 谱图采集频率 – 每张图谱最低只需10 ms 累积时间 – 每秒钟可以采集100张MS图谱 – IDA工作模式下二级采集频率可达100HZ • 高分辨率 – 可以达到4万分辨率 • EasyMass™ 质量准确度 – ~1 ppm RMS (外标) • 线性动态范围 – 大于4个数量级 • 可靠性 – 全新的硬件设计，执行最严格的耐用性标准 高分辨率，高质量准确度，高灵敏度，高采集速度和高定量线性动态范围， 在MS和MS/MS，在定性和定量，总是同时达到。 8 © 2011 AB SCIEX AB SCIEX TripleTOF 系统典型工作模式 1. 纯定性 (Explore) – 高效率的复杂蛋白样本鉴定 2. 定性定量 (Profile) – 高分辨一级定量，二级确认 3. 纯定量 (Quantify) – Targeted高分辨MSMS定量 (MRMHR) 9 © 2011 AB SCIEX TripleTOF质谱系统定性模式 快速准确的蛋白鉴定_Explore工作流程  信息相关（IDA）工作模式 