雪旺细胞对BMSCs 来源内皮细胞分泌一氧化氮的作用研究.pdf

998 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, August 2014, Vol. 28, No.8 · · • 干细胞与组织工程• 雪旺细胞对BMSCs 来源内皮细胞分泌 一氧化氮的作用研究 1 2 2 3 2 4 2 5 蔡喜雨 ， 张鑫鑫 ， 姜晓锐 ， 江汕 裴国献 【摘  要】    目的 研究雪旺细胞（Schwann cells，SCs ）对BMSCs 来源内皮细胞分泌一氧化氮（nitric oxide ，NO ） 功能的影响，为进一步探究组织工程骨成骨过程中神经因素对血管因素的作用奠定实验基础。 方法 取1 日龄SD 乳 鼠坐骨神经及臂丛神经，体外分离获取SCs，采用S-100 免疫组织化学染色鉴定；取2 周龄SD 大鼠胫骨及股骨骨髓，体外 分离获取BMSCs ，诱导分化成为内皮细胞，采用血管性血友病因子与CD31 免疫荧光染色鉴定。采用Transwell 共培养板 对SCs 与BMSCs 来源内皮细胞进行非接触共培养作为实验组，单纯培养BMSCs 来源内皮细胞作为对照组，分别于1、3、5、 7 d 检测培养液中NO 浓度，1、3、7、10 d 采用实时荧光定量PCR （real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR ）检 测一氧化氮合酶2 （nitric oxide synthetase 2 ，NOS2 ）、NOS3 mRNA 表达。 结果 分离及诱导分化的细胞通过形态学及 免疫组织化学和免疫荧光染色鉴定为SCs 和内皮细胞。实验组及对照组内各时间点间释放NO 浓度比较，差异均有统计 学意义（P 0.05 ）；除3 d 外，其余各时间点实验组释放NO 浓度均显著高于对照组（P 0.05 ）。RT-qPCR 检测结果示，培 养各时间点实验组NOS2 mRNA 相对表达量均显著高于对照组（P 0.05 ）；两组内各时间点间比较差异均有统计学意义 （P 0.05 ）。除10 d 外，其余各时间点实验组NOS3 mRNA 相对表达量均显著高于对照组（P 0.05 ）；实验组内各时间点 间NOS3 mRNA 相对表达量比较差异均无统计学意义（F=6.673 ，P=0.062 ），对照组内各时间点间比较差异均有统计学意 义（F=36.581 ，P=0.000 ）。 结论 SCs 可促进BMSCs 来源内皮细胞释放NO ，可能与SCs 促进NOS 活性有关。 【关键词】    骨组织工程    BMSCs    血管化    神经化    一氧化氮    雪旺细胞    大鼠 EFFECTS OF Schwann CELLS PROMOTING NITRIC OXIDE SECRETION OF BONE MARROW MESENCHYMAL /CAI Xiyu1, 2 2, 3 2, 4 2 STEM CELLS DERIVED ENDOTHELIAL CELLS , ZHANG Xinxin , JIANG Xiaorui , JIANG Shan , PEI Guoxian5. 1Department of Orthopaedics, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou Henan, 450052, P.R.China; 2Department of Orthopaedic Traumatology, Nanfang Hospital, Southern