西北大学生物化学dna的复制和修复-l.pptVIP

（四）DNA的半不连续复制 在体内，DNA的两条链都能作为模板，同时合成出两条新的互补链。 DNA分子的两条链是反向平行的，一条链的走向是5/→3/，另一条链的走向是3/→5/；DNA聚合酶的合成方向都是5/→3/。 DNA在复制时两条链如何能够同时作为模板？ 1968年，日本学者冈崎等提出了DNA的不连续复制模型： 3/→5/走向的DNA链实际上是由许多从5/→3/方向合成的DNA片段连接起来的。 这种片断称为冈崎片段。 细菌的冈崎片段长度为1000-2000个核苷酸； 真核生物的冈崎片段的长度为100-200个核苷酸？？？。 P418 以复制叉向前移动的方向为标准： 一条模板链是3/→5/走向，在其上DNA能以5/→3/方向连续合成，称为前导链（leading strand）； 另一条模板链是5/→3/走向，在其上DNA也是从5/→3/方向合成，但是与复制叉的移动方向正好相反，所以随着复制叉的移动，形成许多不连续的片段，最后连成一条完整的DNA链，该链称为滞后链（lagging strand）。 冈崎片段的合成需要RNA引物。 RNA引物是在DNA模板链的一定部位合成并互补于DNA链，合成方向是5/→3/，由引物合成酶催化；通常几个到10个核苷酸；引物RNA的消除和缺口的填补由DNA聚合酶Ⅰ完成，DNA连接酶连接切口。 （五）DNA复制的拓扑性质 核酸的拓扑结构是指核酸分子的空间结构。 通过对DNA的拓扑结构和拓扑异构酶的研究，能了解DNA在复制时双链是如何解开的。 生物体内的DNA分子通常处于负超螺旋状态。 超螺旋DNA处于较高自由能状态，因此如果DNA的一条链有一个切口它就自发转变成松弛态。 负超螺旋状态有利于DNA双链的解开。 DNA的许多生物功能都需要解开双链才能进行，生物体内可通过DNA不同的负超螺旋结构来控制其功能状态。 P419 除连环数不同外其他性质均相同的DNA分子称为拓扑异构体。 引起拓扑异构反应的酶称为拓扑异构酶，拓扑异构酶可分为两类： 类型Ⅰ能使DNA的一条链发生断裂和再连接，反应无需供给能量； 类型Ⅱ能使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，当它引入超螺旋时需要由ATP提供能量。 拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ广泛存在于原核生物和真核生物，拓扑异构酶Ⅰ主要集中在活性转录区，同转录有关； 拓扑异构酶Ⅱ分布在染色质骨架蛋白和核基质部位，同复制有关。 P420 拓扑异构酶Ⅱ可引入负超螺旋以消除复制叉前进时带来的扭曲张力，从而促使双链的解开。 DNA解螺旋酶能将DNA两条链解开，每解开一对碱基消耗2个ATP。 分解ATP的活力要有单链DNA存在（如双链DNA中有单链末端或缺口，解螺旋酶即可结合在单链部分，然后向双链方向移动。 解开的双链随即被单链结合蛋白（SSB）所覆盖，SSB的功能是稳定DNA解开的单链，阻止复性和保护单链免受核酸酶降解。 P420 P421 （六）DNA复制的过程 在DNA合成的生长点，即复制叉上分布着各种各样与复制 有关的酶和辅助因子。它们在DNA链上形成离散的复合物，彼 此配合，进行高度精确地复制，这一结构被称为复制体。共有 各种成分30多种。 在DNA复制叉上进行的基本活动包括： 双链的解开（各种拓扑异构酶和解螺旋酶） RNA引物的合成（引发体） DNA链的延长（DNA聚合酶Ⅲ, E.coli） 切除RNA引物，填补缺口（ DNA聚合酶Ⅰ）；连接相邻的DNA片段（DNA连接酶） 切除和修复掺入DNA链的脱氧尿苷酸和错配碱基（尿嘧啶糖苷酶、AP核酸内切酶、dUTP酶） P421 Only one RNA primer is needed for synthesizing the leading strand. (DnaB) RNA primers Are repeatedly formed by the primase on the lagging strand. The newly synthesized two chromosomal DNA molecules are interlinked (catenated) And are separated by DNA topoisomerase IV. DNA polymera