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诺如病毒衣壳蛋白表达的研究进展 生物技术 张生 诺如病毒 简介： 诺如病毒(Noro virus)是世界范围内引起儿童急性病毒性胃肠炎的主要病原,同时也是造成包括学校、家庭、旅游区、医院、食堂、军队的暴发性胃肠炎流行的重要病原, 对社会生产力产生巨大破坏力,其地位仅次于轮状病毒,国际上被列为B类恐怖因子. 诺如病毒是一组杯状病毒，基因组为单股正链线性RNA(ssRNA)，编码3个开放阅读框（ORFs）分别编码非结构蛋白、衣壳蛋白和一种功能未知的蛋白。 诺如病毒具有生存和变异能力很强的特点，拥有至少十种变异病毒，每一亚型内又有不同种类的毒株，感染一个类型病毒不能预防其他类型的感染。自然感染后缺乏交叉保护，这是很难开发诺如病毒疫苗的原因之一。 诺如病毒在感染病人粪便中排毒量少，排毒时间短，目前有无法在体外进行细胞培养，也没有适合的动物感染模型，在一定程度上限制了诺如病毒的研究。研究通过表达ORF2表达出重组病毒核衣壳蛋白代替天然病毒的核衣壳蛋白。 目前对衣壳蛋白采用多种表达系统和载体进行多层次、不同角度的研究。以下讲述五点内容： 1、诺如病毒衣壳蛋白杆状病毒表达系统 杆状病毒表达系统是一种真核表达系统，具有安全性高，容纳较大的外源基因，具有完备的翻译后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力。 为提高病毒衣壳蛋白的表达量，研究人员将诺如病毒主要流行遗传型的几种衣壳蛋白编码基因按杆状病毒喜用密码子进行了优化设计和人工合成，在昆虫细胞中表达，结果显示，其表达水平具有明显的提高，并可组装成病毒样颗粒，具有良好的功能。 2、诺如病毒衣壳蛋白的原核表达系统 原核表达系统相对于真核表达系统操作简单，尤其是当昆虫细胞培养难获得大量目标产物时更具优势。 研究发现，衣壳蛋白在原核表达系统中，产物不能自动组装成病毒样颗粒，说明病毒样颗粒的形成不是病毒与组织受体结合的必要条件。这样有利于研究各个片段的特性。通过不同重组片段免疫动物，表明衣壳蛋白的氨基端比羧基端富含抗原表位。 衣壳蛋白的原核表达 原核表达系统也能表达出用于免疫研究的病毒衣壳蛋白，并且重组蛋白具有良好的抗原性，且对同一亚型的不同毒株表现为广谱反应。 3、诺如病毒衣壳蛋白腺病毒表达系统 腺病毒作为基因转移工具，具有其他病毒载体不及的优势：腺病毒颗粒比较稳定，基因组较少发生重排，插入外源基因在连续传代中保持不变；基因组操作较简单，易于制备大量病毒；可以感染分裂细胞和非分裂细胞，转导细胞种类多；外源基因表达水平较高。具有抗原制备快，操作安全，抗原不需纯化等优点。 4、诺如病毒衣壳蛋白的毕赤酵母表达系统 毕赤酵母表达系统兼有原核表达系统易于操作培养、快速生长、表达量高的优点，又具有对外源基因进行正确翻译和加工修饰的功能。 5、转基因植物表达系统 研究人员将诺如病毒衣壳蛋白基因转至土豆苗，通过培育、收获果实。实验显示，志愿者服用疫苗后，不产生呕吐、腹泻等症状。口服植物疫苗产量大，易生产，对人体无伤害，是今后研发疫苗的发展方向。 虽然已经研究出了多种表达系统表达诺如病毒衣壳蛋白，但其各有优缺点。 杆状病毒表达系统效率较高，但费时，相对昂贵。原核表达系统操作简单，但有些不能组装成病毒样颗粒。腺病毒表达系统开发疫苗要考虑到重组蛋白可能携带宿主基因，存在安全隐患。酵母表达和转基因植物表达系统开发疫苗前景较好。 * * * * * * * * * 蛋白质的合成 *