3 产业菌种选育.ppt

微生物的特性及工业微生物的要求 菌种的来源 菌种选育、分子育种 ;;工业化菌种的要求;放线菌（链霉素、四环素、红霉素等） ;二、氨基酸生产有关的微生物;氨基酸生产菌的要求：;微生物（包括动、植物细胞）几乎可以生产我们所需的一切产品，但是涉及到工业化生产对于某一种特定的产品，只有特定的微生物才具有大量表达的潜力。;根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏 部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。;二、分离思路 ;定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。 这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。;菌种筛选主要步骤：; 原种斜面 ↓确定发酵培养基础条件 筛选  ↓ 初筛（1株1瓶） ↓ 复筛（1株3～5瓶） ↓结合初步工艺条件摸索 再复筛（1株3～5瓶） ↓ 3～5株 ↓单株纯种分离 ↓ 生产性能试验 ↓→毒性试验 菌种鉴定; （一）采样;; 2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 3、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。;（二）增殖（富集）培养;富集的三种方案：;定向培养的富集方法;;例：醛肟水解酶的筛选 ;目的微生物富集方法的研究进展;（三）培养分离;1.稀释平皿分离法;1.稀释平皿分离法;2.平皿划线分离法 a.分区划线分离法 b.连续划线分离法 ;菌落的选出;在要求获得高产菌株的同时，还应考虑推广到生产过程时的经济问题，在筛选所需菌株时宜考虑的一些重要指标：;（四）筛 选;（五）毒性试验;目的微生物培养分离;1、成功的分离培养方法;2、将生态学方法用于培养分离的一般思路要点; 5．列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中的几丁质、葡萄表皮的果胶； 6．根据上述1-5项中所获得的数据，设计分离方法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天然浸出汁和培养条件； 7．用标准方法作对照来评价生态学分离方法； 8．根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法； 9．运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选意义的微生物类群。; (一)采样和采集方法;采样的注意事项;(二)生态学参数及培养基的组成原则;二、分离;用刚果红染色法鉴定筛选降解纤维素的菌株 ;放线菌的分离培养基的组成原则;土样中放线菌的非选择性分离： 土样风干，磨碎，无菌海绵压印土样后压印平板后培养。 植物体上放线菌的分离： 无菌取植物组织，干燥以减少细菌数量，剪碎植物材料后植入平板表层后培养。也可洗下微生物后振荡培养。 水中放线菌的分离： 为使所要分离的放线菌的数量种类增多，一般将水样离心或滤纸过滤，取离心沉积或滤纸表面沉积进行系列稀释和涂布。;次代培养及纯化;放线菌菌落形态;真菌分离;4、选择性富集：是通过一定的方式使样本中一种或一群微生物数量上的增加而利于分离的一种技术。 富集可以是种水平的，如通过营养要求的改变来富集分离镰刀菌；也可以是组成群水平的，如以纤维素为唯一碳源的选择性培养基可选择性富集所有能降解纤维素的纤维素裂解微生物。 5、在分离培养基中加入一定的抗生素即可有效地抑制细菌生长及菌落形成。;真菌的分离方法;菌株选育、分子改造;优良菌种应具备的特征;基本方法;一、基因突变（genemutation）;从自然界分离到的菌株，简称野生型。 ;突变类型;link1;突变率;基因突变的特点;（2）非对应性;某基因的突变率不受它种基因突变率的影响。;基因突变后的新遗传性状是稳定的、可遗传的。;自然突变有两种情况：;;自然选育操作步骤： ;二、诱变育种;筛选;1. 诱变育种的基本环节; 2. 诱变育种中的原则 （1）选择简便有效的诱变剂; 出发菌株（original strain）是指用于育种的原始菌株，选用合适的出发菌株有利于提高育种的效率。; 在诱变育种中，所处理的细胞必须是单细胞、均匀的悬液状态;诱变剂的作用有三条： 一是提高诱变的频率 二是扩大变异的幅度 三是使变异向正变的方向移动（产量提高