乙肝疫苗的制备.pptxVIP

乙肝疫苗的制备;乙肝疫苗的概念;乙肝疫苗的发展史;乙肝疫苗的制备;;乙肝疫苗的制造工艺;目的基因的获取;工程菌的选择;主要试剂 限制性内切酶、T4 DNA ligase、质粒 DNA 提取和柱式胶回收试剂盒 乙型肝炎表面抗原检测试剂盒 DMEM 和透析胎牛血清 胰蛋白酶、氨甲喋呤（MTX）和脂质体 Lipofectamine TM HBsAg 血凝检测试剂盒;主要试剂 限制性内切酶、T4 DNA ligase、质粒 DNA 提取和柱式胶回收试剂盒 乙型肝炎表面抗原检测试剂盒 DMEM 和透析胎牛血清 胰蛋白酶、氨甲喋呤（MTX）和脂质体 Lipofectamine TM HBsAg 血凝检测试剂盒;编码乙型肝炎表面抗原的基因;蛋白质的分离纯化;固液分离 离心沉淀 膜过滤 双水相萃取 浓缩及初步纯化 离子交换层析 疏水层析 亲和层析 高度纯化 DNA的去除 热原质的去除 病毒的去除 ;分离纯化的基本要求 技术条件温和，保持其生物活性 选择性好，达到有效分离纯化的目的 技术间可以直接连接，节省工艺步骤 收率高，过程快 选择分离纯化方法的依据 根据产物表达形式来选择 根据分离单元之间的衔接来选择 根据分离纯化工艺的要求来选择 ;分离纯化的流程; 1、发酵液的预处理 连续高速离心，除去细胞残片，再超滤浓缩 2、疏水柱层析 介质： Butyl S Sepharose FF 加入适量硫酸铵，调节电导率及柱层析平衡液电导率相等 按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱、降低硫酸铵浓度解析、清柱再生程序层析 ;3、阴离子交换柱层析 介质：DEAE Sepharose FF HBsAg活性蛋白经Sephadex G-25柱脱盐换液，使缓冲盐系统的PH、离子强度和IEC平衡液一致 按照平衡柱床、丄样吸附、氯化钠浓度梯度分段洗脱、清柱再生程序层析;4、凝胶过滤柱层析 介质：Sepharose 4 FF 超滤浓缩到适当体积 按照平衡柱床、丄样、洗脱程序层析 5、除菌 收取到的HBsAg除菌过滤，即为纯品;谢谢