共振光散射法研究金属离子—核固红—蛋白质体系的相互作用及其分析应用.pdfVIP

STUDIES ON INTERACTION OF METAL ION-NUCLEAR FAST RED-PROTEINS SYSTEM USING RESONANCE LIGHT SCATTERING TECHNIQUE AND THEIR ANALYTICAL APPLICATIONS A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan Normal University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Science By Chong Qu Supervisor：Prof. Suling Feng May 2013 摘 要 蛋白质的定量测定是生物化学、生物技术和临床医学中经常涉及的内容。它已经成 为蛋白质研究的一项重要内容，具有重要的意义。因此，建立新的定量测定蛋白质的方 法在很多领域都是非常重要的，如生命科学，临床诊断和定量检测。共振光散射技术因 为灵敏度高、稳定性好、方法简单、试剂廉价、易操作等优点已经被广泛用于蛋白质、 核酸和药物等组分的测定。本文采用共振光散射法并结合荧光光谱法和紫外吸收光谱法 分别研究了金属离子 Cu2+ 、Ca2+和 Al3+与核固红、蛋白质的相互作用。根据共振瑞利散 射信号强度的变化值与蛋白质的浓度成正比，建立了测定纳克级蛋白质的新方法。 在 pH 为 3.7 时，核固红与 Cu2+ 能够形成 2:1 的螯合物。该螯合物在蛋白质表面通 过静电作用力和疏水作用力聚集形成聚合物。该现象不仅导致吸收光谱、荧光光谱发生 变化，而且导致共振瑞利散射明显增强。在 430 nm 处，人血清白蛋白(HSA)和牛血清白 蛋白(BSA)分别在 0.10~8.0 μg/mL 和 0.19~11.4 μg/mL 的浓度范围内与增强的共振瑞利散 射程度成良好的线性关系，对应的检测限分别是 0.076 μg/mL 和 0.105 μg/mL 。在 598 nm 处，HAS 和 BSA 分别在 0.05~3.0 μg/mL 和 0.096~4.78 μg/mL 的浓度范围内与增强的共 振瑞利散射程度成良好的线性关系，对应的检测限分别是 26 ng/mL 和 33 ng/mL 。并对 人血清样品进行了分析。 在 pH 为 4.0 的溶液中，核固红与 Ca2+ 能够形成螯合物。该螯合物通过静电作用力 和疏水作用力在蛋白质表面聚集，导致体系的吸收光谱、荧光光谱和共振瑞利散射光谱 变化。在最佳实验条件下，吸收光谱在 430 nm 处，HSA 和 BSA 分别在 0.3~7.0 μg/mL 和 0.1~9.0 μg/mL 的浓度范围内与增强的共振瑞利散射程度成良好的线性关系，对应的 检测限分别是 23 ng/mL 和 12 ng/mL。此外，在 592 nm 处，HSA 和 BSA 分别在 0.05~2.0 μg/mL 和 0.04~2.0 μg/mL 的浓度范围内与增强的共振瑞利散射程度成良好的线性关系， 对应的检测限分别是 6.0 ng/mL 和 5.0 ng/mL 。方法用于分析人血清、尿样及唾液样品。 在 pH 为 4.0 的溶液中，核固红和Al3+能够形成 1:1 的螯合物。该螯合物通过静电作 用力和疏水作用力与蛋白质发生相互作用形成聚集体。这种作用导致吸收光谱、荧光光 谱变化和共振瑞利散射强度的增强。在 440 nm 处，HSA 和 BSA 分别在 0.20~12.0 μg/mL 和 0.60~26.0 μg/mL 的浓度范围内与增强的共振瑞利散射程度成良好的线性关系，对应 的检测限分别是 19.9 ng/mL 和 40.9 ng/mL 。此外，在584 nm 处，HSA 和 BSA 分别在 I