多蛋白质界面的构建及其电化学生物传感研究.pdfVIP

摘 要 多蛋白质生物界面的研究，有助于了解生物系统中酶促反应的机理。探讨生 物界面中氧化还原蛋白质（或酶）的电子传输过程，能为了解真实生物体系的电 子传输机理提供参考以及发展高灵敏的电化学生物传感器等。多蛋白质生物界面 构建的传感器具有选择性高、操作简单、分析速度快和有望进行在线活体检测等 优点，在食品检测、环境监测以及探究生命体信息传递规律等方面均有重要应用 前景。将具备良好导电性和生物相容性的复合材料以及能很好地保持酶活性的生 物分子材料用于固载多蛋白质，以构建有利于电子转移的生物界面。本研究致力 于发展新型材料固定化技术，以改善所固定的生物蛋白质分子的活性、提高生物 传感器的性能。实验中构筑了一系列多蛋白质生物界面以揭示蛋白质间的相互作 用机理和信息传递规律，并发展性能优越的电化学生物传感器。具体的研究工作 如下： 1. （GOD/Con A ） 二蛋白质多层膜界面的构建及其电化学葡萄糖传感器的 n 研究。利用电沉积技术在玻碳电极（GCE ）表面制备金纳米粒子- 壳聚糖 （AuNPs-CHIT ）纳米复合材料修饰电极。由于AuNPs-CHIT 纳米复合材料具有 大的比表面积和良好的生物相容性，有利于刀豆球蛋白 A （Con A ）固载于修饰 电极表面上，再利用Con A 与葡萄糖氧化酶（GOD ）之间的凝集素-葡糖基生物 特异性结合，固载 GOD 分子，最后重复固载 Con A 和 GOD 制备多层膜界面。 凝集素-葡糖基生物特异性结合方式能使蛋白质 GOD 定向吸附在电极表面从而 可用于研究酶的直接电子传输。同时采用层层自组装（LBL ）技术，可以增大 GOD 的固载量。实验详细研究了GOD 的直接电化学和电催化特性，并测试了检 测葡萄糖的性能指标。 2. 基于 GOD-Cyt c 共固载于 AuNPs-CHIT 修饰电极上构建的新型葡萄糖传 感器的研究。首先将 AuNPs-CHIT 电沉积到GCE 表面上，再将 GOD-Cyt c 共固 载于 AuNPs-CHIT/GCE 修饰电极上。AuNPs-CHIT 复合材料大的比表面积和良 好的生物相容性可增大 Cyt c-GOD 在电极上的表面覆盖度。此外，Cyt c 能为GOD 提供一个生物相容的微环境从而很好地保持 GOD 的生物活性，并且有利于实现 GOD 的直接电子传输。实验发现在检测葡萄糖时，GOD-Cyt c/AuNPs-CHIT/GCE 二蛋白质修饰电极比 GOD/AuNPs-CHIT/GCE 单蛋白质修饰电极的检测范围更 宽、检出限更低，这是因为 GOD 在 O2 存在时将葡萄糖催化氧化生成葡萄糖酸 和 H O ，同时消耗 O 。而 Cyt c 能将 H O 歧化分解为水和 O ，使支持电解质 2 2 2 2 2 2 溶液中的 O2 消耗更慢，从而使检测范围变宽。此研究为构筑性能更加优越的二 I 蛋白质生物界面葡萄糖传感器提供依据。 3. 基于 LBL 的（HRP-Cyt c/DNA ） 多层膜的电子传输及电催化研究。利用 n LBL 技术在 Cyt c 单层膜电极上交替修饰 DNA 和二蛋白质 HRP-Cyt c，制备二蛋 白质多层膜界面。实验研究了组装层数对界面性能、蛋白质相互作用以及电子传 输的影响。比较了二蛋白质多层膜界面与单蛋白质多层膜界面电催化性能的异 同，优化了界面的构筑条件，揭示了蛋白质界面中信息的传递规律，测试了传感 器的性能。基于此二蛋白质多层膜界面构建了高性能的 H O 电化学传感器。 2 2 4. 以Con A 为载体的 Cyt c-HRP 三蛋白质单层膜界面的构建及 H O 电化学