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响应曲面法优化黑木耳多糖的硫酸化工艺研究 组员： xxxx 基于Minitab的响应曲面实验设计 实验介绍 响应曲面法中的Box—Behnken设计是一种寻找多因素系统中最佳条件的数学统计方法，采用该法可建立连续变量曲面模型，对影响因子及其交互作用进行评价，确定最佳水平范围，由于试验组数相对较少，所以广泛应用于各种生物优化过程中。 实验介绍 硫酸化修饰是指通过化学的方法在多糖的结构中，引入硫酸根基团。多糖经过硫酸化后，在分子结构引入了带有负电荷的硫酸根基团，整个分子会显示聚阴离子特性，可以阻断病毒与机体细胞的吸附，从而增加天然多糖的多种生物学活性。黑木耳是药食同源真菌，属真菌类担子菌纲，主要分布在我国东北地区的大、小兴安岭。黑木耳不仅具有很高的营养价值，还具有多种药理功能。国内外文献报道，黑木耳具有抗氧化、降血脂 、降血糖 、抗肿瘤和抗凝血、抗菌等活性，但多糖的水溶性差限制了其活性更好地发挥，而化学修饰可以提高多糖在水的溶解度，增强其生物活性。研究表明，硫酸化多糖的生物活性与硫酸化的程度有一定的关系，通过用浓硫酸法对黑木耳多糖进行修饰，用响应曲面法对黑木耳多糖的硫酸化修饰进行工艺优化，以期达到提高其硫酸化程度，从而增加黑木耳多糖的生物活性 。 实验设计 选取硫酸用量、反应温度和反应时间3个因素，以所制备的黑木耳硫酸酯的硫酸基取代度(DS)为响应值，用Box—Behnken设计了3因素3水平试验，根据单因素试验，3个因素的水平值区间一般在如下范围：温度-20～28℃，反应时间0.5 ~2.5h，反应试剂配比为2：1～4：1，同时考虑模型设计要求值须在中心点周围对称分布，故所取因素水平中心点为反应温度4℃，反应时间1.5h，反应试剂 (浓硫酸：正丁醇)配比3：1，中心点和中心点两侧的水平取值代号0、1和-1表示(表1 )，3因素3水平共17个试验。 将因素水平规范化 规范变量为： 因素水平表 水平 因素 反应时间（A0）//h 反应温度（B0）//℃ 浓硫酸：正丁醇（C0） -1 0.5 -20 2：1 0 1.5 4 3：1 1 2.5 28 4：1 响应曲面实验设计 分析响应曲面设计 取代度的估计回归系数 项 系数 系数标准误 T P 常量 0.537380 0.003670 146.417 0.000 反应时间/h -0.011125 0.002902 -3.834 0.006 反应温度/℃ -0.008787 0.002902 -3.029 0.019 浓硫酸;正丁醇配比 -0.016813 0.002902 -5.794 0.001 反应时间/h*反应时间/h -0.114690 0.003999 -28.676 0.000 反应温度/℃*反应温度/℃ -0.020865 0.003999 -5.217 0.001 浓硫酸;正丁醇配比*浓硫酸;正丁醇配比, -0.134415 0.003999 -33.608 0.000 反应时间/h*反应温度/℃ 0.028825 0.004103 7.025 0.000 反应时间/h*浓硫酸;正丁醇配比 -0.043925 0.004103 -10.705 0.000 反应温度/℃*浓硫酸;正丁醇配比 0.010250 0.004103 2.498 0.041 S=0 PRESS=0R-Sq=99.70% R-Sq（预测）=96.26% R-Sq（调整）=99.32% 取代度的方差分析 来源 自由度 SeqSS AdjSS AdjMS F P 回归 9 0.159106 0.159106 0.017678 262.48 0.000 线性 3 0.003869 0.003869 0.001290 19.15 0.001 反应时间/h 1 0.000990 0.000990 0.000990 14.70 0.006 反应温度/℃ 1 0.000618 0.000618 0.000618 9.17 0.019 浓硫酸;正丁醇配比 1 0.002261 0.002261 0.002261 33.57 0.001 平方 3 0.143775 0.143775 0.047925 711.57 0.000 反应时间/h*反应时间/h 1 0.064406 0.055384 0.055384 822.32 0.000 反应温度/℃*反应温度/℃ 1 0.003296 0.001833 0.001833 27.22 0.001 浓硫酸;正丁醇配比*浓硫酸;正丁醇配比 1 0.076073 0.076073 0.076073 1129.50 0.000 交互作用 3 0.011