基础化学第十四章_常用仪器分析方法概述.ppt

用途 2. 分光光度计的类型 （五）常用分光光度定量方法 二、 荧光分析法 （四）分光光度计 1. 分光光度计的组成 光源 单色器 吸收池 检测器 显示装置 钨灯或碘钨灯 棱镜或光栅 光电管或光电倍增管 可见光 玻璃或石英材料 显示A或T 紫外光 氢灯或氘灯 a自准式单色光器示意图 b棱镜对光的色散作用 （1）单光束 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 （2）双光束 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。 3.双波长 将不同波长的两束单色光(λ1、λ2) 快束交替通过同一吸收池而后到达检测器，产生交流信号。△?=1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。其优点是：可用于混浊样品的测定，适用于多组分混合物的分别测定，无需参比池。 1. 吸收系数法 根据A = kbc，已知摩尔吸收系数κ或比吸 光系数 ，可根据A求出被测物质的组成标度。 E 1 cm 1% 2. 标准曲线法 A5 A4 A3 A2 A1 A0 A 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 空白 c(mol·L-1) ×10-3 A待 = 0.63 c待 =3.2 ×10-3(mol·L-1) 3.2 0.63 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 c(mol·L-1) ×10-3 A = κbc 在制作和使用标准曲线时应注意： 1、一般至少应取五个点； 2、作好曲线后，应注明测试条件，便于他人重复； 测试条件：曲线名称、仪器型号、测定波长、日期等 3、在一定条件下，曲线可连续使用，但要定期校对。 3. 直接比较法： κ标 b 标 c标 A标 A待 = κ待 b 待 c待 c待 = A待c标 A标 A标=κ标b标c标 A待=κ待b待c待 （六）吸光光度法的设计 测定某种物质时，若该物质在紫外-可见区有吸收， 可直接进行测定。 若待测物质是无色或颜色很浅时，需显色后再测定。 例1：核酸在紫外区有吸收，可测定同一样品在260nm 和280nm吸收的比值，估算其纯度。 对于纯RNA，A260/A280约为2， 对于纯DNA，A260/A280约为1.8， 若比值小于1.7，很可能样品被蛋白质或酚类物质污染。 例2：食用合成色素柠檬黄，其最大吸收波长为430nm， 可用紫外-可见分光度法对其进行检测。 1.显色反应及其条件 （1）显色反应与显色剂 M + HR MR + H+ 待测 组分 显色剂 有色化合物 （2）显色条件的选择 ① 显色剂的用量 例： MO(Ⅴ) + SCN－ 1:3 浅红色 1:5 橙红色 1:6 浅红色 M + nHR MRn + nH+ A5 A4 A3 A2 A1 A 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 V(mL) ② 溶液的酸度 a. 酸度对被测组分存在状态的影响 b. 酸度对显色剂平衡浓度及颜色的影响 HR 二甲酚橙 pH＜6 黄色 pH ＞ 6 红色 M + R- MR + H+ HR MR ，红色 * 第十四章 常用仪器分析方法概述 确定物质的含量 确定物质的结构 仪器分析：是以测定物质的物理性质或物理 化学性质为基础建立一种分析方法 确定物质的化学组成 测定速度快 灵敏 准确 取样量少 特点 光学分析法 色谱分析法 电化学分析法 分类 特点： （1）测定的灵敏度高 （2）测定的准确度较高 （3）仪器化 （4）应用广泛 第一节 光学分析法 原理：基于物质对光的吸收或激发后光的发射 光学分析法 吸收光谱法 发射光谱法 紫外-可见吸光光度法 红外光谱法 核磁共振谱 原子吸收光谱法 荧光光谱法 原子发射光谱法 光的波长越短，光的能量就越大； 光的波长越长，光的能量就越小。 h—普朗克(Plank)常量 （一）物质的吸收光谱 1. 光的基本性质 一、紫外-可见分光光度法 E = hc/ l E = hv v = c/ l c = l v c等于3×108m·s-1 比色法，可见吸光光度法 400 ~ 760nm 可见光 紫外吸光光度法 200 ~ 400nm 近紫外 真空紫外光谱法 10 ~ 200nm 远紫外 X射线光谱法 0.1 ~ 10nm X射线 中子活化分析，穆