RNA提取、定量及RT―PCR综合性实验在分子生物学检验技术教学中的实施.docVIP

RNA提取、定量及RT―PCR综合性实验在分子生物学检验技术教学中的实施 　　摘 要 分子生物学检验技术是医学检验专业重要的专业课程，实验教学尤其是综合性实验的教学对学生综合技能的培养至关重要。本文从实验设计思路、 组织实施、 实施效果、 教学体会等方面阐述RNA提取、定量及RT-PCR综合性实验在分子生物学检验技术教学中的实施，并分析教学中存在的问题，提出相应的解决对策，为有关院校开设相关综合性实验教学提供参考。 　　关键词 RNA 综合性实验 分子生物学检验技术 教学 　　中图分类号：G424 文献标识码：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdkx.2016.12.042 　　Abstract Molecular Biology Diagnostic Technique is an important professional course in laboratory Medicine. Experimental teaching， especially the teaching of comprehensive experiment is very important to the cultivation of students comprehensive skills. This paper expound the teaching implementation of comprehensive experiment “extraction and quantification of RNA and RT-PCR” in molecular biology diagnostic technique from the experimental design ideas， organization， implementation， implementation effect， teaching experience and so on. Analyze the problems existing in the teaching， and put forward the corresponding countermeasures. Provide a reference of teaching on experiment of “extraction and quantification of RNA and RT-PCR” for some colleges. 　　Keywords RNA； comprehensive experiment； Molecular Biology Diagnostic Technique； teaching 　　1 实验设计思路 　　RNA提取、定量及RT-PCR综合性实验主要由RNA提取、RNA定量和RT-PCR这三个部分组成。在本校的实验设计中，目标基因采用常用 -actin基因片段。实验首先用TRizol试剂提取小鼠肝脏总RNA，然后用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法检测所提取RNA的纯度和含量，最后利用引物oligo（dT）在逆转录酶作用下制备cDNA模板，通过小鼠 -actin基因的特异引物扩增出 -actin基因片段，并用琼脂糖凝胶电泳法检测扩增产物。实验内容涉及RNA的分离与纯化技术、紫外比色技术、凝胶电泳技术、RT-PCR技术等研究技术与方法，具有较好的实用性和先进性。 　　2 实验组织实施 　　RNA提取、定量及RT-PCR综合性实验所涵盖的知识面非常广，整个实验历时长，对学生的细心程度和实验技能要求较高，在实验过程中，有些试剂（比如TRizol试剂和氯仿）有强烈的刺激性气味且伴有毒性，而且任何一个环节的微小错误，都有可能导致实验最终失败，故实验需要在特殊环境下（如通风橱）进行。为了使学生在实验中能够学到更多的知识，并且顺利地完成实验，首先，学生应该在实验课前通过实验指导书和互联网了解实验的相关内容进行预习，熟悉实验的原理、仪器的使用方法、试剂的作用、操作步骤和注意事项，并与其他学生讨论预习过程中遇到的问题，若仍不能解决，则在老师讲解实验时边听边思考，务必在做实验之前弄懂实验的关键点和每个步骤的目的，尽量避免盲目操作和错误操作；其次，实验施教时，教师通过PPT展示和现场演示进行讲解，同时提出问题让学生回答，加深学生对实验要点的理解，并解答学生在预习过程中遇到的疑惑；再次，学生了解清楚每个步骤的操作、目的和注意事项后，开始进行实验，实验过程中，学生严格按照实验指导的说明来进行操作，在通风厨中进行加样，且要注意戴好口罩和手套，防止酶等因素影响实验，教师应督促和提醒学生是否有不当的操作，辅助学生完成实验；最后，教师对实验结果进行引导性的讲解，布置学生