五株鸡传染性支气管炎病毒流行株的分离鉴定.docVIP

五株鸡传染性支气管炎病毒流行株的分离鉴定 　　摘要：2012年1月-2014年8月，从全国多地出现传染性支气管炎发病养鸡场（户）中采集病（死）鸡气管、肾脏和腺胃进行流行病学调查。根据各地分离株与YB160株S1基因分子进化树分析，筛选出5个代表性的毒株，在SPF鸡胚中传至第5代，分别进行毒价测定、无菌检验及对SPF鸡的致病力研究。结果，所筛选出的5个流行株在SPF鸡胚传至第5代时，毒价均大于或等于106.1EID50/0.1 mL，菌检阴性，人工感染试验接种1日龄SPF鸡，可引起试验鸡出现典型传染性支气管炎症状。 　　关键词：鸡传染性支气管炎；分离鉴定；流行株；QX型 　　中图分类号：S852.65 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）23-6187-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.23.046 　　Abstract：From January， 2012 to April，2014，we did epidemiological investigation by collecting tracheas，kidneys and glandular stomachs of diseased chickens from emerged the infectious bronchitis disease chicken farms（households）. According to the analysis of local isolates and YB160 strain’s S1 gene molecular evolutionary tree，we sifted five representative strains. We spread the five strains to the fifth generation with SPF chicken embryo，then we did drug price determination，sterile inspection and the pathogenicity study of SPF chicken of each strain. In the results，we found that when the five strains spread to the fifth generation，drug prices were all higher than 106.1EID50/0.1 mL，sterile inspections were all negative，and artificial infections used 1 day-old SPF chicken could cause typical symptoms of infectious bronchitis. 　　Key words：Avian infectious bronchitis virus； isolation and identification； epidemic strain； QX type 　　鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis，IB）是由冠状病毒科（Coronavirdae）冠状病毒属（Coro-nav irus）的传染性支气管炎病毒（Infectious bron-chit is virus，IBV）引起的一种急性高度接触性传染性疫病[1，2]。自20世纪30年代在美国暴发以来，现已成为世界各地流行的重要禽病[2]。IBV是单股RNA病毒，该病毒基因可因点突变和重组而发生变异，故传染性支气管炎病毒血清型较多[2]。由于IBV的主要中和抗原表位和保护性表位主要由纤突蛋白（S 蛋白）的S1蛋白决定[2，3]，各血清型毒株之间的差异主要是S1基因变异造成的[4]，所以，针对S1基因的研究在IBV的流行病学研究中具有重要代表意义。 　　由于IBV疫苗的大量使用所带来的的免疫选择压力，大量的流行病学监测结果显示，近年来国内流行的IBV毒株处于持续不断的进化当中。QX型毒株是近十多年才开始流行的新的基因型，其原型株QXIBV最早由农业部动物检验所于1996年分离自青岛某发生腺胃炎的鸡群（动物回归试验未复制出腺胃炎病变）[5]，但直到2004年该型病毒才被证实在国内广泛流行，临床表现主要为肾病变和不同程度的腺胃病变；而包括俄罗斯、荷兰、比利时、德国、法国等在内的多个欧洲国家也在同一时期发现存在该型毒株的流行。根据韩宗玺等[6]对1995～2009年共计15年间国内可检索到S1基因全长序列的所有IBV分离株进行的遗传进化分析，结果显示国内至少同时流行10个以上基因型的IBV毒