第二章色谱导论.ppt

色谱导论 色谱概述及分类 色谱分离过程和色谱图 柱色谱法的定性定量分析方法 第一节 概述及分类 一、色谱法的由来 1906年由俄国植物学家Tsweet创立植物色素分离 A.J. P. MARTIN 和R.L.M. Synge 三 色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作 四 色谱法定义、实质和目的 定义：利用物质的物理化学性质建立的分离、分析方法 实质：分离 目的：定性分析或定量分析 五 分类： 1．按两相分子的聚集状态分： 2．按固定相的外形分 六 色谱法的特点 优点： 高选择性—可将性质相似的组分分开 高效能—反复多次利用组分性质的差异产生很好的分 离效果。 高灵敏度—10-11－10-13g，适于痕量分析。 分析速度快—几十分钟完成一次分离，可测多种样品 应用范围广—气体，液体、固体物质，经化学衍生化 后再色谱分离分析。 缺点：对未知物分析的定性专属性差 进一步分析需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS) 第二节 色谱分离过程和色谱图 一 色谱过程：被分离组分在两相中的“分配”平衡过程 以分配色谱为例： 进入固定相→返回流动相→再进入固定相→再返回流动相→反复多次分配→被测组分分配系数不同→ 差速迁移 → 分离 微小差异积累 → → 较大差异 → → 分配能力弱的组分先流出；分配能力强的组分后流出 二、色谱流出曲线和色谱峰 1．流出曲线和色谱峰 由检测器输出的电信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。曲线上突起部分就是色谱峰 2. 基线 色谱柱后仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线称为基线，S/N大、稳定的基线为水平直线 3. 峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示 4. 保留值 保留值是试样中各组分在色谱柱内滞留时间的数值，反映了组分分子与固定相分子间作用力的大小，是组分的色谱行为。 (1)死时间 tM 不被固定相保留的组分（如空气、甲烷）进入色谱柱时，从进样到出现色谱峰极大值所需的时间称为死时间。死时间也是流动相流经色谱柱所需要的时间，流动相平均线速度可表示为： (2) 保留时间tR：试样组分从进样到柱后出现浓度最大值时的时间。 保留时间就是组分通过色谱柱的时间，或者说组分在柱内运行的时间。 (3) 调整保留时间：某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时间。即 tR=tR-tM 保留时间是色谱定性依据。但同一组份的保留时间与流速有关，流动相流速大，保留时间相应降低，两者的乘积仍为常数；而保留体积与流速无关，因此有时需用保留体积来表示保留值。 （4）死体积VM：不被保留的组分通过色谱柱所消耗的流动相体积。它是指未被固定相占据的空隙体积，还包括色谱仪管路、连接头间空隙以及检测器间隙。 死体积VM可由死时间与流动相流速(?Fo与温度和气压有关)来计算： VM =tM Fo （5）保留体积VR：指从进样到待测物在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。 VR =tR Fo （6）调整保留体积：某组份的保留体积扣除死体积后的体积。 VR= VR-VM=tR Fo 死体积反映了色谱柱和仪器系统的几何特性，它与待测物的性质无关，故保留体积值中扣除死体积后将更加合理的反映被测组分的保留特性。 保留值:试样的各组分在色谱柱中的滞留时间，通常用时间或用将组分带出色谱柱所需载气的体积表示。 被分离组分在色谱柱中的滞留时间主要取决于它在两相间的分配过程，保留值是由色谱分离过程中的热力学因素所控制的，在一定的固定相和操作条件下，任何一种物质都有确定的保留值。 只要柱温，固定相性质不变，即使柱径，柱长，填充情况及流动相流速有所变化，保留体积和调整保留体积都不变。 同一组份的保留时间与流速有关；保留体积VR和调整保留体积VR 与流速无关。 5 相对保留值 r2,1 （1）组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比 （2）表示固定相的选择性，等于1不能分离 （3）相对保留值的优点是只要柱温，固定相性质不变，即使柱径，柱长，填充情况级流动相流速有所变化，相对保留值仍保持不变，因此它是色谱定性分析的重要参数 6 选择因子 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（s），再求其它峰（i）对这个峰的相对保留值，以α表示： 7