细菌透明质酸酶基因工程菌的构建及高效表达.pdfVIP

食品与药 品 FoodandDrug 2014年第 16卷第5期 3O5 · 论 著 · 细菌透明质酸酶基因工程菌的构建及高效表达 钊倩倩 ，张秀华 ，刘 飞 ，李珍爱 ，朱希强 ’¨，凌沛学 (1．山东省生物药物研究院 山东省生物药物重点实验室，山东 济南 250101；2．山东省药学科学院 山东省多 糖类药物工程实验室，山东济南250101；3．山东福瑞达医药集团公司，山东济南250101) 摘 要：目的 将兽疫链球菌透明质酸酶^yf基因在大肠杆菌原核表达系统中高效分泌表达。方法 通过PCR方法扩增得兽疫 链球菌 )，，基因，XhoI和^7_c0I双酶切后，连入表达载体pET26b(+)，并转化入大肠杆菌，经低温异丙基—D一硫代半乳糖苷 (IPTG)或乳糖诱导表达，DNS法检测胞外透明质酸酶活性。结果 成功构建含兽疫链球菌透明质酸酶基因．iz，的大肠杆菌 基因工程菌株，经IPTG诱导并添加甘氨酸后胞外透明质酸酶活性高达5．3×10U／mL。 结论 实现了透明质酸酶在原核系 统中的表达，为工业化生产奠定了基础，具有很好的市场前景。 关键词：兽疫链球菌；透明质酸酶；大肠杆菌；基因工程；分泌表达 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1672．979X (2014)05-0305—04 ConstructionandHighExpressionOfHyalurOnidaseGenefrom Streptococcuszooepidemicus inEscherichiacoli ZHAOQian．qian，，ZHANGXiu．hua，LIUFei’。，LIZhen．ai。’，ZHUXi．qiang，，，LINGPei．xue (1．InstituteofBiopharmaceuticalsofShandongProvince，KeyLaboratoryofBiopharmaceuticals，Jinan 250101，China；2．ShandongProvincialEngineeringLaboratoryofPolysaccharideDrugs，ShandongAcademyof PharmaceuticalSciences，Jinan250101， ina；3．ShandongFredaPharmaceuticalGroupCo．，Ltd．，Jinan250101， China) Abstract：ObjeetiveToobtainhighlevelsecretoryexpressionofhya1uronidasehylgenefrom Streptococcus zooepidemicusinEscherichiacoli．M ethodsTheStreptococcuszooepidemicushyaluronidasehylgenewas amplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)，connectedtopET26b(+)vectorafterdigestedbyXhoIandNcoI，and transformed intoEscherichiacoliBL21strain．TherecombinantplasmidpET26-hylwasexpressed inEscherichia coliBL21，whichwasinducedbyisopropyl一D一1一thiogalactopyranoside(IPTG)orlactoseatalow temperature．The extracellularhya1uronidaseactivitywasdetectedby3，5一dinitrosalicylicacid(DNS)method．ResultsTheStreptococcus zooepidemicushyaluronidasehy，genewassuccessfullyexpressedinEscherichiacoliatahighleve1．Thecrudeenzyme activitydetectedbyDNSmethodwasup to 5．3×10 U／mL afterindu