灰霉菌GFP转化子致病力分析及其与小立碗藓互作体系的建立.pdfVIP

摘要 灰霉菌具有广寄主、耐低温、致病力强等特点，是一种重要的植物采后致病菌。 菌株0023是一株分离自葡萄的灰霉菌，具有大量产孢的特性。本文以灰霉菌0023 为材料，试验优化了聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化法，建立了适于灰霉菌0023 的转化体系，并对转化方法进行详细描述。使用此法获得了携带荧光标记且致病力 稳定的转化子。将转化子用于果实及小立碗藓侵染，发现小立碗藓具有良好的感病 性，同时小立碗藓具有易于培养、世代交替明显和遗传信息明确的优势，是难得的 用于病害互作研究的寄主材料。我们建立了灰霉菌与小立碗藓的病害互作体系，在 荧光显微镜下观察灰霉菌荧光转化予侵染举动时，该病害互作体系具有明显优势。 主要结果如下： 1．PEG介导的原生质体转化法能够用于灰霉菌0023的转化。浓度为15mg／mL Lysmgenzyme(Sigma 质体最适酶解条件。 2．40％PEG3350用于转化，0．6MKCI高渗溶液及20％蔗糖浓度的SHA适于灰 霉菌0023原生质体复苏，复苏时间为2周，复苏率为30％。． 要量为lgg外源基因，用于107个／mL原生质体。以此法获得转化子比率为 1／106。 4．荧光转化子Gl在激发光下发出绿色荧光，常温下培养5d长满平皿，第5d产孢 10 量为4．25 4个／bm2，第3d乙烯释放量为1．19止庙，低温对其生长影响不大， 能够侵染葡萄及小立碗藓。以果实为寄主，不利于荧光转化子侵染举动观察。 个／mL，可导致小立碗藓迅速发病，病程为2周。 6．能导致苔藓萎蔫的病原真菌总状毛霉也能够导致小立碗藓萎蔫，这是总状毛霉 作为苔藓病原菌的首次报道。 7．小立碗藓能够感受灰霉菌、总状毛霉及镰刀菌侵染，分别表现出萎蔫和坏死2 种明显病症，接种荧光转化子后观察十分方便，适于病害互作研究。以此建 立小立碗藓病害互作体系。 本研究建立了适于灰霉菌0023的转化方法及外源基因表达体系，探讨了小立碗藓作 为适于荧光转化子侵染举动观察的寄主材料，验证其对病害的敏感性，提出了建立 灰霉菌与小立碗藓病害互作体系对病害研究的重要意义。 关键词 灰霉菌；GFP；原生质体；小立碗藓；互作体系 Abstract cinemacausesmolddiseasesinabroad of addition Botrytis gray rangeplantspecies，in t0itscoldtolerance cinemaisoneofthemost and劬百cideresistance，Botrytis cinerea0023isastrainisolatedfrom for neerotrophicpathogens．Botrytis grapes，typical itsmass workshowedthatthereisacertain sporulation．Ourprevious relationship between and ofstrain thestraincan 0023，and ethylenepathogenesis produceethylene itselfbothinvivoandinvitro．Inordertofindtheroleof inthe mould ethylenegrey mutants is whichthe necessary