原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
微卫星筛选办法课件
微卫星筛选方法 Microsatellite isolation strategies;什么是微卫星（Microsatellite）？ ;;完美（perfect）重复型;不完全（imperfect）重复型;;;传统筛选法;骆桨回冶尔诗鲁跪壹囊菏冕瑰嗓搅枉臃岸炯纯蝶慈韭获烩的暖福恨栽诛秧微卫星筛选方法课件微卫星筛选方法课件;传统筛选法;基于引物扩增的方法;基于引物扩增的方法;选择性杂交法;FLASCO法（Fast isolation by AFLP of Sequences COtaining repeats） ;1 DNA抽提
2 酶切连接
3 AFLP特异扩增
4 探针杂交
5 磁珠洗脱
6 双链恢复
7 质粒连接
;（1）DNA抽提
- Sambrook et al. 1989；其它方法
（2）酶切连接
- Mse I + T4 Ligase
（3）AFLP特异扩增DNA片段
- 酶切连接液为模板
- Mes I – N 引物
;（4）探针杂交
- 5，端生物素修饰的重复碱基探针与扩增产物杂交
（5）磁珠洗脱
- 磁珠特异性吸附杂交片段，洗脱除去未杂交片段
;（6） 双链??复
- 磁珠富集得到的目的单链以Mes I - N为引物特异扩增恢复为双链
（7） 质粒连接
- PMD18-T vector
;（8） 转化克隆
- DH5-α感受态细胞
涂板，37℃培养 11-13h
（9）单克隆扩增培养
- 挑取白色饱满菌落液体培养基培养5h
（10）菌落PCR选择目标克隆
- 三引物法
扩增产物为双带
;（11）测序
-目标克隆菌液测序
（12）引物设计及优化
- CID软件分析序列及设计引物
- 引物扩增条件优化
（13）荧光PCR及基因分型
- 荧光修饰引物特异扩增
- 基因分型
;（14）数据分析
- Genescan 读取基因分型数据
- 位点多态性信息
- 位点是否偏离哈温平衡
- 位点是否连锁不平衡;淘金成功！！;谢谢！
文档评论（0）