野蔷薇苷抑制EA.hy926内皮细胞缺氧所致损伤的作用及机制.pdfVIP

中文摘要 野蔷薇苷抑制EA．hy926内皮细胞缺氧所致损伤的作用及机制 摘 要 的保护作用，并探讨其可能机制。 DMEM培养液置二氧化碳培养箱中培养，待细胞生长成单层后备用。2、 损伤模型。3、通过MTT法及LDH检测确定野蔷薇苷高、中、低剂量组 药物浓度，细胞随机分为正常对照组、缺氧损伤模型组、野蔷薇苷1× 含量观察不同剂量野蔷薇苷对EA．hy926内皮细胞缺氧损伤的保护作用。 检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质氧化代谢产物丙二醛 (MDA)含量，研究野蔷薇苷对缺氧所致内皮细胞脂质过氧化损伤的保 性。7、通过RT-PCR、Western VEGF mRNA及其蛋白表达的差异。 结果：1、倒置相差显微镜下观察，正常培养EA．hy926内皮细胞，呈 上皮样贴壁生长，胞体饱满，折光良好，细胞成多角形或扁平短梭形，细 胞核为圆形，椭圆形，可见核仁1～2个，呈鹅卵石样铺满底层。 韵延长，细胞活性明显降低，LDH外漏增加，曲线较陡。2--一，6h间，随缺 氧时间的延长，细胞活性下降幅度变小，LDH外漏量曲线趋于平缓，故 确定2h为模型缺氧时间。 3、LDH活性检测及MTT法确定野蔷薇苷高、中、低剂量组药物浓 度分别为1×10一umol／1、l×10。1mold、1×10qzmol／1。 (1)MTT 4、野蔷薇苷对EA．hy926内皮细胞缺氧损伤的保护作用： 检测显示：与正常对照组比较，缺氧损伤模型组细胞代谢活力下降 中文摘要 (尸O．01)；与缺氧损伤模型组比较，红景天苷及高、中、低剂量野蔷薇 缺氧损伤模型组细胞胞体变小，核固缩，深染，部分细胞核肿大淡染，细 胞间隙增大。红景天苷、野蔷薇苷各剂量干预组细胞形态、结构均明显改 善。(3)细胞外LDH活性检测：与正常对照组比较，缺氧损伤模型组培 养液中LDH活性显著升高(尸O．01)；与缺氧损伤模型组比较，红景天苷 及野蔷薇苷各剂量组培养液LDH活性均显著降低(尸O．01)。 ·． 5、野蔷薇苷对EA．hy926内皮细胞缺氧损伤保护作用的机制探讨： (1)生化检测：与正常对照组比较，缺氧损伤模型组EA．hy926内皮细 野蔷薇苷各剂量组，与缺氧损伤模型组比较均可提高细胞内SOD活性 与正常对照组比较，缺氧损伤模型组细胞NO含量减少，NOS活性降低 (P0．01)，而野蔷薇苷各剂量组和红景天苷组，与模型组比较NO含量、 比，模型组HIF．1a mRNA的 mRNA的表达量显著升高(氏O．01)，VEGF 表达量无统计学差异；与模型组相比，各剂量野蔷薇苷组及红景天苷组 mRNA的表达量明显升高 HIF．1a的表达量显著下降(尸O．01)，VEGF 一一pO．01)。(3)WesternBlot和ELISA实验结果显示，mF．10【和VEGF蛋 白表达水平与其mRNA检测结果相一致。 结论：野蔷薇苷对血管内皮细胞缺氧损伤具有显著的保护作用，提示 其可能是蕨麻中具有抗缺氧功能的重要活性成分。其作用机制可能与抗氧 自由基作用、促进NO的合成与释放、促进VEGF基因高表达有关。 氧自由基，内 关键词：野蔷薇苷；EA．hy926内皮细胞；缺氧损伤； 皮功能 英文摘要 and EffectsMechanismsofRosamuitin inhibitingHypoxia to EndothelialCells InjuryEA．hy926