遗传性纤溶酶原激活剂抑制物-1缺乏症的诊断、治疗及发病机理的研究.pdfVIP

遗传性纤溶酶原辙活荆抑制物．1缺乏症的诊断、治疗及发ji；i机理的研究 中文提要 中文提要 研究背景：纤溶系统是止血功能的重要组成部分，参与血管再通及组织修复 等过程，维持内环境的稳定。纤溶酶原激活剂抑制物，l(PAI．1)是纤溶系统的重 要负调控因予，它通过与组织型(tPA)或尿激酶型(uPA)纤溶酶原激活剂形成1：1的 复合物，抑制纤溶酶的产生。遗传性PAl．1缺乏症是～种罕见的常染色体隐性遗传 的出血性疾病，其病因是由于PAl．1的缺乏，其功能下降，导致纤溶系统失衡，造 成纤溶亢进。典型的临床表现是：平时无自发性出血，在手术或外伤后出现延迟 性出血，即可以有短暂的止血，但随后是持续不断的慢性渗血不止。我们在临床 工作中发现一例遗传性PAl一1缺乏症患者，并对其发病机理进行了研究。 病史：患者，男，1970年生，自幼在皮肤破损后出血不止，愈合缓慢。在肢 体碰撞后即出现血肿，经保守治疗后可逐渐消退，但无自发性皮肤粘膜出血。两 年前因右大腿血肿而手术，手术期间与术后渗血不止，冷沉淀物与凝血酶原复合 物无效，经大量输注血浆与全血后血止。一月前因外伤在左大腿及左臀部形成两 个巨大血肿。患者父母为非近亲婚配，无家族史。 38．9s，PT14．9s，TT 实验室检查：凝血过筛试验正常(APTT 15．3s，纤维蛋 72％，肾上腺素60％，胶原88％．瑞斯 抗原9513％。血小板聚集试验正常(ADP AU／mI(正常 2 2抗纤溶酶(oAP) 对照O．41AU／m1)，PAI．1抗原5．6n卧Ill(正常对照44ng／m1)。o 活性127．7％(正常对照98．6％)。 诊断：患者具有典型的临床表现，多次测定凝血过筛试验及血小板功能检查 均正常，而ECLT明显缩短，血浆中加入生理浓度的PAI．1后ECLT恢复至正常， 血浆PAI．1活性和抗原均明显下降，tPA抗原和活性及o2AP活性均正常，可明确 诊断为PAl一1缺乏症。 治疗：血肿清除手术前开始给患者静滴抗纤溶药物氨甲苯酸0．49，q8h,手术 过程顺利，出血不多。术后剂量仍为O．49，qSh，但左臀部仍有少量渗血，加大剂 量至O．59，q6h，渗血逐渐停止。 遗传性纤溶酶原激活剂抑制物·1缺乏症的诊断、治疗及发病机理的研究 中文提要 发病机理研究：(1)测序i为进一步探讨造成患者血浆PAl．1下降的机理，明 确患者基因是否有异常改变，扩增息者PAI一1基因各外显子DNA，PCR产物多次直 位)有G—A的杂合性改变，该突变导致信号肽的15位丙氨酸(GCC)突变为苏氨 切位点，患者和其父亲为杂合子，其余家庭成员和60例正常人PCR产物不能被酶 切，排除了该突变为基因多态性的可能。(3)从人脐静脉内皮细胞中扩增PAl．1 变型质粒p刚。1 M43，并瞬时转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。ELISA法和发色底物法分 别测定转染细胞培养上清PAl一1抗原和活性，免疫印迹分析胞浆中PAl-1蛋白表达。 性在野生型均大于突变型，而胞浆中PAt一1蛋白表达量无明显差异。 讨论：PAl．1信号肽长23个氨基酸，本例患者信号肽15位的氨基酸突变位于 疏水区，其周围为几个连续的疏水性氨基酸，丙氨酸为疏水、非极性氨基酸，苏 氨酸为亲水、极性氨基酸，当突变为苏氨酸时，其极性改变，可能影响了信号肽 的正常功能，从而影响了PAI．1蛋白在胞内的运输和分泌。为进一步探讨该突变在 发病中的作用，我们构建了表达PAl．1eDNA全长的野生型及突变型质粒，并将其转 染至CHO细胞进行瞬时表达，发现在培养上清中突变型PAI．1抗原及活性较野生型 减低，约为70％．而胞浆中PAl．1蛋白含量一致，表明