《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》【直接打印】.doc

《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》 中国疾病预防控制中心 二○一○年五月二十日 前 言 丙型肝炎呈全球性流行。据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3%，估计约1.7亿人感染HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。我国病毒性肝炎的发病人数一直位所有传染病，而发病率在病毒性肝炎中上升势。丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病，丙型肝炎病毒慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。丙肝给人类带来了如此巨大的危害，在目前还没有疫苗的情况下，重要。然而，大众对于认知的欠缺、患者缺乏明显症状、在高危人群中早期发现患者的机制的缺乏，都防治巨大在卫生部和有关领导的支持下，组织国内有关专家，制订了我国。现代医学的发展日新月异，新理论、新观点、新的诊断技术和新的防治不断出现，将根据最新的临床医学证据修改和更新。庄辉鲁凤民目 录 第一章 丙型肝炎病毒 1 1．病毒形态和基因组结构 1 2．基因型 2 3．复制和细胞嗜性 2 4．致病性和免疫性 3 第二章 丙型肝炎病毒抗体检测 5 1．概述 5 2．试剂 5 3．检测方法及程序 5 4．抗体检测注意事项 10 5．抗体检测的意义 11 6．结果报告和解释 11 第三章 丙型肝炎病毒抗原检测 13 1．概述 13 2．试剂 13 3．检测方法及程序 14 4．抗原检测注意事项 14 5．抗原检测的意义 15 6．结果报告和解释 15 第四章 丙型肝炎病毒核酸检测 16 1．丙型肝炎RNA定性检测 16 2．丙型肝炎病毒RNA定量检测 17 3．丙型肝炎病毒基因型检测 23 第五章 丙型肝炎病毒检测策略 26 1．疫情监测相关的检测策略 26 2．临床诊断相关的检测策略 27 3．血液筛查相关的检测策略 30 第六章 丙型肝炎病毒细胞培养 32 1．丙型肝炎病毒的细胞培养模型 32 2．体外细胞培养技术在丙型肝炎病毒检测中应用的展望 33 第七章 实验样品的采集、保存、运输 35 1．样品采集 35 2．样品保存与运输 35 第八章 丙型肝炎病毒检测实验室的室内质量控制及能力验证 37 1．室内质量控制 37 2．能力验证 41 第九章 实验室生物安全 46 1．丙型肝炎病毒相关检测的生物安全级别 46 2．实验室生物安全保障措施 47 3．实验室安全操作 48 4．职业暴露及其处理 50 参考文献 52 第一章 丙型肝炎病毒病毒形态和基因组结构HCV是一种有包膜的RNA病毒。病毒体为直径4060nm的球状颗粒，包膜表面刺突结构。用有机溶剂提取去除包膜后可暴露其中心的核衣壳，直径约33nm。经蔗糖梯度离心后血清中的HCV颗粒分布于3个组分：浮密度为1.041.06g/ml者为与血清中脂蛋白结合的病毒颗粒；1.091.1g/ml者为游离的病毒颗粒；浮密度为1.171.24g/ml的病毒颗粒与血清中抗体结合以免疫复合物形式存在。HCV属黄病毒科Flaviviridae）丙型肝炎病毒属epacivirus）。HCV单股正链RNA病毒，基因组总长约9.6kb，编码的开放读框open reading frame，ORF），翻译成一个约3000个氨基酸的前体蛋白。在HCV ORF两侧分别有一个5非编码区和3非编码区，均具有复杂的二级结构。5非编码区含有内部核糖体进入位点nternal ribosome entry site，IRES），可直接与40S核糖体亚单位结合，启动HCV前体蛋白的翻译。 翻译启动后首先产生HCV前体蛋白。由宿主细胞的信号蛋白酶和HCV自身编码的蛋白酶加工成约10个成熟的HCV编码蛋白。HCV结构蛋白位于前体蛋白的氨基端1/3，由宿主细胞的信号蛋白酶加工，包括核心蛋白core）、2个包膜糖蛋白和一个小的p7蛋白。非结构蛋白NS）位前体蛋白的羧基端2/3，包括NS2NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B，其加工由HCV自身编码的蛋白酶介导，其中NS2-3自身蛋白酶切割NS2和NS3间的连接，而NS3丝氨酸蛋白酶负责下游NS3至NS5B间的加工成熟图。 图 HCV基因组结构蛋白阿拉伯数字代表各成熟蛋白的第一位氨基酸残基位置；细箭头所指处由宿主细胞的信号蛋白酶切割实心粗箭头所指处由HCV NS2-3自身蛋白酶切割空心粗箭头所指处由HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶切割。其中NS3-4A间的连接为顺式切割，而NS4ANS5B为反式切割。基因型HCV分6个主要基因型及不同亚型，按照国际通行的方法，以阿拉伯数字表示HCV基因