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电穿孔简介 Gene Pulser Xcell 电穿孔的工作原理是什么? 电穿孔的基本原理是将细胞置于一个瞬时的高电场的环境中，此高电场的环境使得细胞膜的表面出现很多小孔，这种条件下细胞膜对于环境中分子的透性大大增加，这样就可以将外源分子进入细胞。 利用上述的原理，那么采用电穿孔的方法就可将DNA等其他类的生物分子导入细胞内部进行研究，如蛋白分子、糖类分子等等。 采用电穿孔的优点 本质上属于物理的方法，不采用任何化学试剂，因此不会对细胞产生损伤 操作方便 低毒性 高的转染效率 使用于种类广泛的细胞 电穿孔的主要应用 导入标记基因，起到标记、指示的作用 导入具体的功能基因进行研究 导入药物、蛋白、抗体等其他分子对细胞的结构和功能进行研究 具体的工作原理? 将细胞和外源DNA混合后一起放在电击杯内 电击杯被加上电压后，细胞膜进行重排，细胞表面出现很多小孔 外源DNA分子通过上述形成的小孔进行细胞内部 当外界的电场撤消后，细胞膜表面的小孔重新关闭，这时阻止外界的分子再进入细胞 Gene Pulser Xcell 电穿孔系统 主要的优点、特点 提供指数波和方波2种电穿孔条件，可对任何的真核细胞、原核细胞的电转染实验条件进行优化 采用Bio-Rad专利的 PulseTrac电路和电弧保护设计，可确保实验的重复性并保护样品 模块化的设计可方便用户根据不同的实验要求进行选择 友好的数字化界面，可直观的编程控制所有的参数，包括附属模块的参数 提供多种操作模式，包括手动设置、预设模式、用户编程等多种方式 主要的优点、特点：2种波型 电穿孔的过程中可以有2种波型来控制外界电压的变化 The Gene Pulser Xcell可以提供2种波型，即指数波和方波 Exponential Decay 电容器充电到预定的电压(v0)放电后，即向样品释放脉冲，细胞表面的电压随时间按指数方式下降的 电容器的电压值达到峰值释放脉冲后迅速的衰减 电场强度 E (V/cm) 是用来描述电击杯外界电场环境的一个参数（E=V/d） 脉冲时间是一般用时间常数来进行衡量 (~37% of V0， V0/e) 脉冲的时间是由电阻和电容的大小所决定的 GPX和指数波 GPX产生指数波的电路结构 GPX和指数波 GPX产生指数波的电路结构 GPX和指数波 GPX产生指数波的电路结构 PulseTrac 电路是如何确保每次实验电压的精确度及实验的重复性 在每次放电前， PulseTrac电路都会预测整个放电回路的电阻值，并计算得到应该加在电容器上的电压，确保放电后样品上获得的电压和理论电压值的一致 在放电回路中3欧姆的电阻可以起到减小回路中电流的作用，适当的保护样品 注意： PulseTrac 回路技术是Bio-Rad公司的专利技术，其他任何厂家都不能提供 PC模块的结构与原理? 电流会经过电阻最小的通路 PC模块中的电阻决定了脉冲过程中的时间常数，电阻越小，放电时间越短 方波 电容器的指数放电过程中被截止后就会形成方波，其时间常数远大于脉冲时间 脉冲时间就是细胞被放电的时间 脉冲是可以被反复释放的，在低压回路最多可以重复10次，在高压回路最多可以重复2次 脉冲的间隔时间就是指2个脉冲间的时间 脉冲下降是指终止电压和起始电压值之间的差值 GPX和方波 高电压回路: 一次充电，一次脉冲。在下一次脉冲前，电容器需要重新充电 最多只能进行2次脉冲，脉冲时间为0.05 – 5msec，脉冲间隔为5-30sec 低电压回路: 该电路是可调的，因此可一次充电，进行多次的脉冲 最多可进行10次脉冲，脉冲时间为0.05-100msec，脉冲间隔为 0.1 – 10 sec 特点: PulseTrac电路和电弧保护 PulseTrac电路确保样品上所加电压的精确度 将CE模块中的低压电容器的精度从20%提高到10% 电容器的校正方便，确保每次脉冲的精确，并且能修正随着使用而产生的电容器指标的偏差 在每次脉冲前就能预测样品的电阻 当脉冲或电路中断时，可进行安全的放电，确保安全 电弧保护设计，确保设备和样品的安全 什么是电弧保护? 在电击杯中出现电阻特别小的区域时，就会形成短路，产生电弧。样品缓冲液中的离子成分就会造成电弧现象 只要上述电阻突然变小的情况被检测到，那么电流就不会经过样品 电弧保护就是在存在短路的情况下，使电流不经过样品，确保样品不受强电流的损伤 如果样品量很少的话，那么产生的热量会使得样品蒸发 如果由于样品的低电阻而产生电弧，那么GPX会给出提示，并不能提供脉冲 特点: 模块化设计 特点: 友好的操作界面 图表化的操作界面可以设置所有的实验参数，包括附属模块的参数 特点: 可选择的程序设置 1. 指数波