绵羊卵母细胞体外核成熟抑制及其对胚胎发育潜力的影响3.pdfVIP

动物学报 　48 (6) :741～748 , 2002 A cta Zoologica S inica 　　　　　 　 绵羊卵母细胞体外核成熟抑制及其 对胚胎发育潜力的影响 周红林　马　峻　季维智 ( 中国科学院昆明动物研究所生殖生物学实验室, 云南昆明 650223) 摘 　要 　本研究旨在探讨次黄嘌呤 + dbcAMP 或 IBMX + dbcAMP 对绵羊卵母细胞体外成熟的可逆性抑制作用 , 以及这种抑制作用对卵母细胞胚胎发育潜力的影响。自绵羊卵巢分离卵丘 - 卵母细胞复合物进行体外培养 , 培 养基中分别加入或不加入上述抑制剂。培养 6 h 后各组取部分卵母细胞固定染色检查卵母细胞核成熟情况 ; 将其 余的卵母细胞分别移入无抑制剂的成熟培养基中继续培养 18 h 后 , 再次检查各组卵母细胞核成熟情况 , 并进行 体外受精和胚胎培养。结果表明 : 次黄嘌呤 + dbcAMP 或 IBMX + dbcAM 都分别能使 60 %以上的绵羊卵母细胞 抑制在 GV 期。这种抑制是可逆性的 , 去除抑制剂后卵母细胞能恢复减数分裂 , 并加快由 GVBD 到 M Ⅱ的成熟 过程。各处理组受精率、卵裂率和囊胚发育率与对照组相比无显著性差异 , 表明卵母细胞的胚胎发育潜力没有 受损。上述物质对卵母细胞成熟的可逆性抑制可用于研究卵母细胞成熟及其胚胎发育潜力的调节机制。 关键词 　绵羊 　卵母细胞成熟 　胚胎发育潜力 　cAMP 　次黄嘌呤 　IBMX 　体外培养 　　未成熟卵母细胞虽然能在体外完成减数分裂过 用于体外成熟培养的卵母细胞 , 尤其是取自屠 程 , 但只有少部分卵母细胞能发育为囊胚并具有妊 宰动物的卵母细胞 , 可能是来自不同发育阶段的个 娠能力 ; 体内成熟卵母细胞的受精和胚胎发育能力 体 ; 而且 , 卵巢表面的可见卵泡以小卵泡占多数 高于体外成熟的卵母细胞 ( Holm et al . , 1994 ; (Lonergan et al . , 1994) 。因此 , 当将卵母细胞自 McCaffrey et al . , 1991 ; Nagashima et al . , 1996 ; 卵泡中分离出来时 , 许多卵母细胞可能还不完全具 Schramm et al . , 1994) 。这些结果提示卵母细胞 备胚胎发育潜力。哺乳动物卵母细胞体外成熟培养 的体外成熟 , 尤其是细胞质的成熟并不完全正常。 一般只经历 24 到 48 h , 而在体内情况下 , 从小卵 哺乳动物卵母细胞的发育和分化经历着一个漫 泡发育到优势卵泡所需的时间却远不止于此。例 长的过程 , 从胚胎时期开始 , 一直到排卵前卵母细 如 , 直径 2～6 mm 的牛卵泡需要4～10 d 才能发育 ( ) 胞才获得完全的发育能力。在排卵前的生长发育阶 为直径约 15 mm 的优势卵泡 Sirad et al . , 1992 ; 段中 , 卵母细胞的减数分裂和胚胎发育潜力都是随 人卵泡生长发育到优势卵泡的时间可长达 14 d 卵泡发育和卵泡直径增大而逐渐获得、并逐步得到 (Calderon et al . , 1993) 。因此 , 卵母细胞体外成 完善。最终 , 卵母细胞能完成核成熟与细胞质成 熟培养时 , 卵母细胞生长发育阶段被人为地缩短可 熟 , 以支持早期胚胎发育。这种卵泡直径对卵母细 能是