超声波处理提高红花遗传转化率的研究.pdfVIP

陕西农业科学2014，60(11)：38—40 ShaanxiJournalofAgriculturalSciences 超声波处理提高红花遗传转化率的研究 付宏岐，薛 萍 ，史俊卿 (渭南职业技术学院，陕西 渭南 714000) 摘 要：为研究超声波处理对红花 (CarthamustinctoriusL．)遗传转化效率的影响。试验以裕 民无刺红花品种 无菌苗子叶作为外植体，采用叶盘法转化红花，在根癌农杆菌侵染外植体时分别进行 0min、0．5min、1min、3 min、5min的超声波处理，采用PCR检测筛选转基因红花阳性植株。结果表明，超声波处理0．5min能有效提 高红花遗传转化率。PCR检测初步证明重组 目的基因已整合到转基因红花基因组中。 关键词：红花；农杆菌；超声波；遗传转化 菊科 (Compositae)红花 (Carthamustinctorius EHA105，其 中含有植物表达载体质粒 pCAM— L．)属一年生草本植物 ，是油用、药用和工业用 BIA1390Do(以下简写为 p1390Do)，该质 粒含 经济作物，很多国家均有分布_2J。除新疆、四川I、 DDprm—Ddoil基因(大豆油体蛋 白启动子 一大豆 云南、河南等省红花主产区外，现全国各地均有栽 油体蛋 白基因)和 FGF21基因，抗性筛选标志为 培_2J。目前，我国各地在红花育种方面仍然以引 潮霉素 (hptII) J。 种和常规选育为主，尚未取得突破性进展。1992 1．2 植物材料 年MiaochengYing等 成功将 GUS转入红花，此 红花 (CarthamustinctoriusL．)种子，购于新 后，农杆菌介 导的红花遗传转化研究报道较 疆塔城裕 民县。将用流水冲洗过的红花种子用 多 。国内杨晶等用红花 7d龄子叶作受体，通 70％乙醇浸泡 30S，然后用 0．1％升汞消毒 10 过农杆菌感染，将酸性成纤维细胞生长因子 (aF． min后，无菌水漂洗3次，然后播种在 1／2MS固 GF)、人表皮生长因子 (hEGF)、碱蓬耐盐碱基因 体培养基中，25℃、黑暗条件下培养2d。 (ScVP)等转入红花中获得再生转基因植物，但是 1．3 培养基配方及培养条件 方法单一、转化效率低和实验重复性差而限制 了 以MS为基本培养基，调节pH值至5．8。培 研究工作的开展 ～ 。采用农杆菌介导法，将外 养温度25℃，光照强度 2000～3000lx，每天光 源基因的转入受体植物中，其转化效率受到许多 照 16h，黑暗8h。受体植物材料侵染液为：液体 因素影响。具有特殊生物学效应的超声波有利于 MS+200p,mol·L AS(乙酰丁香酮)。 农杆菌进入外植体，现已被广泛应用到植物的基 根据文献 方法优化的培养基配方： 因遗传转化等领域。赵东力等 以发根农杆菌 (1)种子萌发培养基 ：1／2MS。 转化苦豆子 的子叶和下胚轴 ，超声波辅助处理后 (2)共培养基 ：MS+1．0mg·L～6一BA+0． 的外植体转化率分别 比对照高 69．3％和 29．3％。 2mg ·L一 NAA +100 Ixmol·L一 AS+30 g ·L一 实验选择新疆裕 民无刺红花品种无菌苗子叶作为 蔗糖 +7g·L 琼脂 。 外植体，研究了超声波处理对农杆菌介导红花遗 (3)抑菌培养基：MS+1．0mg·L～6一BA+ 传转化效率的影响，并将成纤维细胞生长因子21 0．2mg·L NAA+300mg·L 特美汀(Tim)+ (FGF21)基因导入红花基因组中。 6mg·L 潮霉素(Hyg)+30g·L 蔗糖+7g·