孑遗植物双蕊兰菌根真菌培养条件的优化.docVIP

孑遗植物双蕊兰菌根真菌培养条件的优化 　　摘要：以兰科孑遗植物双蕊兰（Diplandrorchis sinica）菌根为材料，通过分离、纯化、培养其菌根真菌，根据正交试验设计原理，利用正交试验方法筛选温度、碳源、氮源和培养基pH等培养条件建立双蕊兰菌根真菌培养体系。结果表明，双蕊兰菌根真菌菌落白色或浅黄色，呈均匀辐射状向外生长；生长面有稀松或较丰富的气生菌丝，带有透明液滴。通过对菌落生长速率的测定与分析，4种因素的最佳综合水平为：碳源为半乳糖，浓度为2%；氮源为硝酸铵，浓度为0.5%；pH为6；温度为25 ℃。菌落生长速率随着天数的递增而以较快的速度下降，第7天之后趋于稳定。 　　关键词：双蕊兰（Diplandrorchis sinica）；孑遗植物；菌根真菌；培养条件 　　中图分类号：S182 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）22-5798-04 　　DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2016.22.018 　　Diplandrorchis Sinica Mycorrhizal Fungi Optimization of Culture Conditions 　　QU Bo1， JIANG Yu-ling1， ZHANG-YI Zi-han1，2， ZHANG Li-jie1 　　（1.Bioscience and Technology College， Shenyang Agricultural University， Shenyang 110866， China； 　　2.College of Life Science， Inner Mongolia University， Hohhot 010021，China） 　　Abstract： The Orchid relict plant Diplandrorchis sinica fungi were used as materials. By separation，purification and cultured， the D. sinica mycorrhizal fungi culture system which based on the principle of orthogonal design was established， using orthogonal experimental method to set culture conditions that include temperature，carbon source，nitrogen source and medium pH. The results showed that the white or pale yellow colonies of D. sinica fungi showed the uniform radial outward growth，growth surface of sloppy or rich aerial hyphae with transparent droplets. Through measurement and analysis of colony growth rate，best level of four factors were as following： The carbon source was concentration of 2% galactose； The nitrogen source was concentration of 0.5% ammonium nitrate； pH was 6； The temperature was 25 ℃. Colony growth curve showed downward-trend， with the increase in the number of days，and finally tends to a constant value. 　　Key words： Diplandrorchis sinica； relict plant； mycorrhizal fungi； culture conditions 　　?p蕊兰（Diplandrorchis sinica），兰科双蕊兰属植物，为单属种，腐生兰，是兰科中最原始的植物之一[1]，是研究兰科植物起源与系统进化的重要材料。目前双蕊兰仅在辽宁省桓仁县和新宾县有发现，其种群量极少，已被列入国家保护植物名录[2]，2012年被评估为国际自然保护联盟濒危物种红色名录（IUCN）极危（Critically endangered，CR）物种[3]。双蕊兰生育期极短，通常8月中旬萌