基因工程主要技术原理-研究DNA-蛋白质互作的-西北师范大学.PPT

第六节 研究DNA与蛋白质相互作用的方法 凝胶阻滞试验方法 凝胶阻滞试验用途 2.6.2 DNasel足迹试验 DNasel足迹试验过程 足迹试验的优点 DNasel足迹试验发展 2.6.3 甲基化干扰试验 甲基化干扰试验的具体操作 甲基化干扰试验的用途 DMS化学干扰的主要局限性 2.6.4 体内足迹试验 体内足迹试验的方法 体内足迹试验优缺点 思考题 * 基因工程 第二章 基因工程技术原理 西北师范大学 又叫做DNA迁移率变动试验，是80年代初出现的用于在体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。简单、快捷，是当前被选作分离纯化特定DNA结合蛋白质的一种典型的实验方法。 在凝胶电泳中，由于电场的作用，裸露的DNA朝正电极移动的距离是同其分子量的对数成反比，如果DNA分子结合上一种蛋白质，那么由于分子量加大，在凝胶中的迁移作用便会受到阻滞，朝正电极移动的距离也就相在缩短了。所以当特定的DNA片段同细胞提取物混合之后，若其在凝胶电泳中的移动距离变小了，这就说明它已同提取物中的某种特殊蛋白质分子发生了结合作用。 2.6.1 凝胶阻滞试验 原理 返回目录 返回第二章 首先是用放射性同位素标记待检测的DNA片段（亦称探针DNA），然后同细胞蛋白质提取物一道温育，于是便有可能形成DNA一蛋白质复合物。将它加样到非变性的凝胶中，在控制使蛋白质仍与DNA保持结合状态的条件下进行