2010-9-和8 第三次分子生物学研究方法.pptVIP

酵母单杂交法 酵母单杂交（yeast one－hybrid system)是一项常用于研究DNA与蛋白之间的相互作用的方法。 特点：通过该方法可以识别稳定结合于DNA上的蛋白质 ，可在酵母细胞内研究真核生物DNA与蛋白之间的相互作用，并通过筛选cDNA文库直接获得能与DNA靶序列相互作用的蛋白的编码基因。 转录激活结构域 （activation domain，AD） DNA结合结构域 （DNA binding domain，BD） 基本原理： 顺式作用元件 报告基因得到表达 激活启动子 真核生物转录因子基本构件 基本操作过程为: cDNA与已知酵母转录激活结构域（AD）融合 导入酵母细胞 基因产物 （蛋白质） 顺式作用元件 激活Pmin启动子 报告基因得到表达 筛选阳性克隆 测序分析 cDNA替换了编码结合结构域(BD)蛋白基因 应用领域： 主要用于确定某个DNA分子与某个蛋白质之间是否存在相互作用 用于分离编码结合于特定顺式调控元件或其他DNA位点的功能蛋白基因； 验证反式作用因子的DNA结合结构域； 准确定位参与特定蛋白质结合的核苷酸序列。 5.4 核酸杂交技术 （一）Southern Blot （二）Northern Blot （三）斑点杂交 5.4 核酸杂交技术 （一）Southern Blot 原理： 将待检测的DNA分子经限制性内切酶消化后，通过琼脂