DNA的变和性和复性.pptVIP

制作人：刘康 吕胜 微生物PPT课题制作 * * DNA的变性和复性 一）DNA的变性 二）DNA的复性 三）核酸分子杂交 * 变性(denaturation)和复性(renaturation) 是双链核酸分子的两个重要物理特性。 是核酸研究中经常引用的术语。 双链DNA、RNA双链区，DNA: RNA杂种双链(hybrid duplex)以及其它异源双链核酸分子(heteroduplex) 都具有此性质。 * 一) DNA的变性 指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。 本质：氢键和疏水键断裂 部分的或全部的 可逆的或非可逆的 不涉及到其一级结构的改变 * §变性DNA 的理化及生物学性质 溶液粘度降低 溶液旋光性发生改变 增色效应或高色效应 DNA的增色反应 * §破坏双螺旋稳定性的因素 ⊙加热 ⊙极端的pH ⊙甲醇 ⊙乙醇 ⊙尿素 ⊙甲酰胺 * 热变性使DNA分子双链解开所需温度 ( melting temperature) 很狭的温度范围内突发的跃变过程 §熔解温度（Tm） * 不同来源DNA间的Tm存在差别的原因 （A）DNA的均一性 DNA分子中碱基组成的均一性 待测样品DNA的组成是否均一 * (B) DNA的(G+C)含量 (G+C)含量越高，即G-C碱基对越多，Tm值越高。 Tm与(G+C)含量(X)百分数的关系可用以下经验公式表示(DNA溶于0.2mol/L NaCl中)： X%(G+C)=2.44(Tm—69.3) DNA的Tm值与G-C含量的关系 * 离子强度低，Tm值低，融点范围宽 离子强度增高，Tm值增高，融点范围变窄 DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中，一般保存在1mol/Ｌ NaCl溶液中较稳定。 （C）溶剂的性质 * 二) DNA的复性 指变性DNA 在适当条件下，两条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象。 是变性的一种逆转过程 经缓慢冷却即可复性，又称为“退火” * 热变性过程和两种冷却过程示意图 * §影响因素 a）温度和时间 比Tm低25℃左右的温度是复性的最佳条件 越远离此温度，复性速度就越慢 复性时温度下降必须缓慢 降温时间太短及温差大不利于复性 * b）DNA浓度 复性速度与DNA浓度的平方成正比 * c）DNA顺序的复杂性 　　 顺序越简单，配对越快。 　　DNA片段愈大，扩散速度愈低，复性越慢。 　　盐浓度越高，复性速度越快。 d）DNA分子的大小 e）溶液的离子强度 *