DNA提取纯挥氙.pptVIP

基因工程需要三种不同的DNA: 全细胞DNA(总DNA, total cell  DNA) 质粒DNA 噬菌体DNA 学习内容： 制备细胞总DNA 培养、搜集细菌细胞 制备细胞提取物 DNA纯化、浓缩 质粒DNA提取 根据分子大小分离 根据结构分离 质粒扩增 提取噬菌体DNA 噬菌体的培养、收集、纯化 纯化M13 DNA 1.制备总DNA 1.1培养、搜集细菌细胞 两种类型的细菌培养基的成分： M9培养基(确定成分培养基)：g/L Na2HPO4(6.0) KH2PO4(3.0) NaCl(0.5) NH4Cl(1.0) MgSO4(0.5) 葡萄糖(2.0) CaCl2(0.015) LB培养基(不确定成分培养基) ：g/L typtone(10) 提供氨基酸以及肽段 Yeast extract(5) 提供氮源、糖类、有机和无机营养 NaCl(10) 1.1培养、收集细菌细胞 1.2 制备细胞提取物 利用溶菌酶、EDTA或两者结合。 溶菌酶是存在于蛋清或眼泪、唾液等分泌物中，能消化细胞壁的多聚物。 EDTA络合保持细胞结构完整的钙离子，也可以抑制DNA酶的活性。 提取液中同时还加入SDS，使细胞膜破裂，协助细胞壁的溶解。 1.3 DNA的纯化 去掉DNA以外