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NMR方法解析蛋白质结构 冯银刚 北京核磁共振中心 () 北京大学化学与分子工程学院 fyg@ yingangfeng@ 蛋白质结构层次 氨基酸通过肽键形成的生物高分子 一级结构、二级结构、三级结构、四级结构 核磁共振方法解析蛋白质溶液结构 测定原子（氢原子）之间的距离信息和其他约束信息，得到空间结构模型 化学结构（氨基酸序列，即一级结构）已知，测定空间结构（三级结构，四级结构） 适用范围——分子量 分子量受限：谱峰重叠，分子增大造成横向弛豫时间减少（线宽增加） 同核二维1H谱：80氨基酸 异核多维（二维、三维）： 常规三共振（1H,15N,13C） 200氨基酸 氘标记，特殊标记 已报道有700氨基酸 同核样品可以是天然提取、化学合成或分子生物学方法培养制备 标记样品通常只能通过分子生物学方法培养制备 常规样品 浓度：毫摩尔每升 500uL 10kDa ? 5毫克每样品 均一 没有聚合 水溶液（10%重水锁场） pH7.5 常用缓冲体系：Tris-HCl, 磷酸盐，醋酸盐 稳定性：室温下大于一周 NaN3 蛋白酶抑制剂 蛋白质的一维谱 同核方法 指认方法不同：2D 1H-1H 两种样品：H2O, D2O 实验 TOCSY, COSY, NOESY 自旋系统指认，序列指认 指纹区：HN-HA每个残基一个峰 同核方法指认 三共振方法—以杨树谷氧还