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  • 2017-11-09 发布于浙江
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NMR方法解斡膂蛋白质结构

NMR方法解析 蛋白质结构 冯银刚 北京核磁共振中心 () 北京大学化学与分子工程学院 fyg@ yingangfeng@ 蛋白质结构层次 氨基酸通过肽键形成的生物高分子 一级结构、二级结构、三级结构、四级结构 核磁共振方法解析蛋白质溶液结构 测定原子(氢原子)之间的距离信息和其他约束信息,得到空间结构模型 化学结构(氨基酸序列,即一级结构)已知,测定空间结构(三级结构,四级结构) 适用范围——分子量 分子量受限:谱峰重叠,分子增大造成横向弛豫时间减少(线宽增加) 同核二维1H谱:80氨基酸 异核多维(二维、三维): 常规三共振(1H,15N,13C) 200氨基酸 氘标记,特殊标记 已报道有700氨基酸 同核样品可以是天然提取、化学合成或分子生物学方法培养制备 标记样品通常只能通过分子生物学方法培养制备 常规样品 浓度:毫摩尔每升 500uL 10kDa ? 5毫克每样品 均一 没有聚合 水溶液(10%重水锁场) pH7.5 常用缓冲体系:Tris-HCl, 磷酸盐,醋酸盐 稳定性:室温下大于一周 NaN3 蛋白酶抑制剂 蛋白质的一维谱 同核方法 指认方法不同:2D 1H-1H 两种样品:H2O, D2O 实验 TOCSY, COSY, NOESY 自旋系统指认,序列指认 指纹区:HN-HA 每个残基一个峰 同核方法指认 三共振方法 —以杨树谷氧还

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