taqman探针与原理.pptVIP

是RNA探针。TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5’末端，而淬灭剂则在3’末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。常用的荧光基团是FAM，TET，VIC，HEX。 而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。 * 相当于60元/ml T公司mix，扩PPARa定量 纳米taq配制的mix，扩PPARa定量 32个循环 95℃ 5 min； 95℃ 5 s ， 58℃ 10 s ， 72℃ 10s ； 72℃ 25s ； 25℃ 1s 。 （可以3min，但为了结果稳定性，最好5min。） *