胶体金技术在免疫检测中的应用.pdfVIP

第 17期 江苏科技信息 No．17 2014年 9月 JiangsuScience＆TechnologyInformation September，2014 胶体金技术在免疫检测中的应用 张静静 ，崔哓辰 (1．潍坊职业学院，山东潍坊 261041；2．潍坊三维生物工程集团有限公司，山东潍坊 261061) 摘要：胶体金技术与其他免疫标记技术相比较，具有独特的优势，目前在多个领域得到广泛应用，发展潜力巨大。文章将 胶体金技术在免疫学检测领域做一综述，希望能够给从事相关研究的工作者提供一些帮助。 关键词：胶体金；免疫印迹；免疫层析技术 0 引言 2．2 肉眼水平检测的应用 胶体金技术是8O年代发展起来的一门免疫新技术，为四 2．2．1 凝集试验中的应用 大免疫标记技术 (荧光素、放射性同位素、酶和胶体金)之一 ，其 抗原抗体特异性结合胶体金颗粒后，胶体金溶胶颗粒极度 最大特点是简单快速、准确直观。从最初的免疫电镜技术，到 增大，颗粒沉降，溶液颜色随溶胶颗粒大小变化，变化的速度和 今天免疫层析技术、生物传感器技术及染色体的基因定位技术 程度与被测物的量相关，这样可以通过肉眼观察或者一定波长 等，胶体金技术结合其他生物技术应用越来越广泛。 下进行光吸收度的测定，定性或定量检测被测物。实验证明，这 1 胶体金技术基本原理 种方法比胶乳凝集试验玻片法灵敏度高。 胶体金技术首先要制备胶体金溶液。一定条件下，氯金酸 2．2．2 胶体金免疫结合试验的应用 (HAuC1)水溶液中的金离子受还原剂作用还原成金原子，并 胶体金免疫结合试验基本上采用 “抗体一抗原一抗体一胶体 聚集成符合应用要求直径的纳米金(nanogold)颗粒 ，金颗粒表 金”夹心法，特异性抗原抗体作为捕获抗原或抗体包被到微孔 面吸附负离子 (AuC12-)和正离子 (H)，产生静电作用 ，这样形 滤膜上，加入待测标本后，标本中的抗体或抗原经滤膜毛细管 成稳定的胶体溶液，这就是胶体金溶液。然后在胶体金溶液中 作用特异性结合微孔滤膜上包被的抗原或抗体，再加入胶体金 加入蛋白质等大分子物质进行标记，这实际上是在特定条件下 结合物显色反应 ，进行定性或定量。一般分为斑点免疫金渗滤 这些大分子物质吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。在PH值 试验 (dotimmunogoldfiltrationassay，DIFA)和胶体金免疫层析 等于或稍偏碱于蛋白质等电|的胶体金溶液中，蛋白质分子表 试验(goldimmun0chmmatographyassay，GICA)l ，最大的区别 面张力最大 ，且与胶体金颗粒之间静电作用较小，较易吸附于 在于检测装置的不同。 胶体金颗粒表面形成蛋白层，并阻止胶体金颗粒相互接触，使 DIFA技术的基本原理是将待测液滴在一种预吸附有捕获 胶体系统处于稳定状态。 目前常用的制备胶体金的方法有柠 抗原的特殊滤纸上，待测液中的目标抗体被滤纸上的捕获抗原 檬酸钠还原法、抗败血酸还原法、白磷还原法等。 捕获，然后滴人金标抗人免疫球蛋白探针 (gold—antihuman— 2 胶体金技术在免疫学检测中的应用 IgG)，通过结合抗体一抗原复合物，金颗粒被吸附在滤纸上而显 2．1 光镜及 电镜水平上的应用 色红色斑点 ，显示 阳性结果 ；反之，如果待测液中没有 目标抗 光镜水平上，胶体金技术结合单克隆抗体技术可检测活体 体 ，则金颗粒将全部通过滤纸不显斑点，显示阴性结果。DIFA 组织或组织切片中的抗原 、检测培养细胞表面及胞内的抗 检测过程迅速，几分钟即可 ，灵敏