核苷酸与核与酸.ppt

History 1944: proved DNA is genetic materials (Avery et al.) 1953: discovered DNA double helix (Watson and Crick) 1968: decoded the genetic codes (Nirenberg) 1975: discovered reverse transcriptase (Temin and Baltimore) 1981: invented DNA sequencing method (Gilbert and Sanger) 1985: invented PCR technique (Mullis) 1990: launched the human genome project 1999: HGP in China 2001: accomplished the draft map of human genome 稀有碱基（rare bases） 一、核酸的一级结构（primary structure） 定义：核酸中核苷酸的排列顺序。 组成DNA分子的脱氧核糖核苷酸(dAMP, dGMP, dTMP, dCMP)的排列顺序。 组成RNA分子的核糖核苷酸(AMP, GMP, UMP, CMP)的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 EM image of supercoiled DNA DNA的功能(Functions of DNA) 基因组（Genome） 包含了所有编码RNA和蛋白质的序列及所有的非编码序列。 人的基因组有2×109个碱基对。 tRNA的一级结构特点 含稀有碱基较多 3′末端为 - CCA-OH *解链曲线(Melting curve of dsDNA) 在连续加热DNA的过程中以温度对A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 EM image of denatured DNA 　热变性的DNA在复性过程中，具有碱基序列部分互补的不同的DNA之间或DNA与RNA之间形成杂化双链的现象。 四 、其他小分子RNA及RNA组学 除了上述三种RNA外，细胞的不同部位存在的许多其他种类的小分子RNA，统称为非mRNA小RNA (small non-messenger RNAs，snmRNAs)。 非mRNA小RNA（snmRNAs） snmRNAs的种类 核内小RNA (snRNA) 核仁小RNA (snoRNA) 胞质小RNA (scRNA) 催化性小RNA 小片段干扰 RNA (siRNA) snmRNAs的功能 参与hnRNA和rRNA的转录后加工和转运以及基因表达过程的调控等。 核酸的理化性质 The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 一、核酸的一般理化性质 核酸为多元酸，具有较强的酸性； DNA是线性高分子，粘度极大； 在260nm波长有最大吸收峰，是由碱基的共轭双键决定的。这一特性常用作核酸的定性、定量分析。 腺嘌呤 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50 ?g/ml双链DNA 40 ?g/ml单链DNA（或RNA） 20 ?g/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的应用 二、DNA的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素作用下，DNA双链 解开成两条单链的过程。 变性因素：过量酸、碱、 加热等。 变性后理化性质的主要改变： OD260增高 粘度下降 DNA的紫外吸收光谱 增色效应(hyperchromicity) DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 * Tm：紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 三、DNA的复性与分子杂交 * DNA复性(renaturation) 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 减色效应 DNA复性时，其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 Cooperative unwinding of DNA strands Extremes in pH or high temperature Denaturation of DNA 一、DNA 的一级结构 四种脱氧核糖核