核酸发酵课与件.ppt

§1 核酸类物质的概述 核苷酸 Nucleotide 　　由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。戊糖与碱基合成核苷，核苷与磷酸合成核苷酸，4种核苷酸组成核酸。 根据糖的不同，核苷酸有核糖核苷酸及脱氧核苷酸两类。 根据碱基的不同，又有腺嘌呤核苷酸（腺苷酸，AMP）、鸟嘌呤核苷酸（鸟苷酸，GMP）、胞嘧啶核苷酸（胞苷酸， CMP）、尿嘧啶核苷酸（尿苷酸，UMP）、胸腺嘧啶核苷酸（胸苷酸，TMP）及次黄嘌呤核苷酸（肌苷酸，IMP）等。 许多单核苷酸也具有多种重要的生物学功能，如与能量代谢有关的三磷酸腺苷（ATP）、脱氢辅酶等。某些核苷酸的类似物能干扰核苷酸代谢，可作为抗癌药物。 嘌呤核苷酸的结构 嘧啶核苷酸的结构 1、核酸类物质的生产现状 1868年，Miescher从浓血细胞的细胞核中发现核酸物质。20世纪40年代对核酸分子的结构认识及其在生命活动中的作用有重大突破。 1913年日本小玉新太郎发现干松鱼的鲜味是因含有5′-肌苷酸而引起。1960年日本又发现5′-鸟苷酸的呈味效果，继而发现呈味核苷酸与谷氨酸钠（味精）并用时，对谷氨酸钠具有强烈的助鲜效果。此后不久，日本对5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸进行工业化生产，80年代年产量已达4000 吨左右。 中国80年代后对核酸制品生产开展研究工作，年产5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸能力为50～80吨。目前预计年产量在300吨。 2、核酸类产品的应用 食品添加剂：强化食品风味，对咸、酸、苦、腥味等有消杀作用。 以5‘-鸟苷酸（GMP)、 5’-肌苷酸(IMP) 和5‘-黄苷酸(XMP)及其二钠 盐为代表。 功能食品添加剂：婴儿乳制品中添加，可增强婴儿的免疫功能，减少婴儿腹泻的发生 。近年来欧美、日本已在婴儿奶粉中添加核苷酸(推荐用量为72mg/L)，这对于提高婴儿免疫力十分有效（人奶与牛奶的区别）。 临床治疗药物：嘌呤类似物8-氮鸟嘌呤和6-巯基嘌呤具有与抗生素类似的功能，可以抑制癌细胞生长；9-β-D阿拉伯呋喃糖基腺苷聚肌胞用于治疗疱疹；阿糖胞苷、阿糖腺苷可治疗急性白血病，具有抗癌和抗病毒功效。S-腺苷蛋氨酸及其盐类用于治疗帕金森氏症、失眠并具有消炎镇痛作用。 药物中间体：5‘-AMP可用于制造ATP、环AMP、S-腺苷甲硫氨酸等生化药物产品， 5’-CMP用于制造胞二磷胆碱、CTP、阿糖胞苷、聚肌胞等生化药物；5-UMP参与肝脏解毒物质葡萄糖醛酸苷的生化合成，具有重要生理作用，还可制造UTP、聚腺尿、UDP-葡萄糖等药物。 此外，核苷酸在农业上也有良好的应用前景，用核苷酸及其衍生物进行浸种、蘸根及喷雾，可以提高农作物的产量。 3、核酸类产品的生产方法 化学合成法：工艺复杂，设备条件要求高。 核糖核酸（ribonucleic acid,简称RNA）水解法：酶法和化学 用糖质原料或亚硫酸制浆废液等制备酵母菌体，从菌体中分离出RNA，水解RNA，得到5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸。制备RNA的原料，以酵母菌最为实用,一般培养产朊假丝酵母、酿酒酵母等酵母。工业生产上以 2％热食盐水从其菌体中抽提出RNA最为简便。RNA含量为干菌体的10-15％。 用化学法水解RNA：若以氢氧化钙作水解剂，则几乎全部水解成核苷，分离所得到的核苷，再用化学法使其磷酸化，可制得5′-肌苷酸、5′-鸟苷酸。 酶法水解：采用的5′-磷酸二酯酶, 在橘青霉和金色链霉菌存在此种酶。现在工业生产上培养这些菌株作为酶源。采用橘青霉的5′-磷酸二酯酶水解RNA时,得到的产物为5′-腺苷酸、5′-鸟苷酸、5′-胞苷酸、5′-尿苷酸混合物。还需采用米曲霉产生的5′-腺苷酸脱氨酶将混合物中的5′-腺苷酸脱氨生成5′-肌苷酸。 发酵法和化学法相结合的方法：先采用微生物发酵的方法,生产出核苷,然后再经化学法进行磷酸化，最终得到5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸。 采用枯草杆菌、产氨短杆菌、短小芽孢杆菌的腺嘌呤营养缺陷型发酵生产肌苷，再用化学法使其磷酸化得到5′-肌苷酸。亦可采用对抗菌素有抗性的枯草杆菌突变株发酵生产鸟苷,同样再经化学磷酸化,生成5′-鸟苷酸。 直接发酵法：利用微生物发酵直接生产5′-肌苷酸、5′-黄苷酸。 微生物以葡萄糖为原料直接发酵生产5′-核苷酸，必须解决使所生成的核苷酸透过细胞膜和不使生成的核苷酸分解成核酸碱基和核苷的问题，现根据代谢调控机制选育出的菌株，已成功地解决了这一问题。采用对锰离子不敏感的产氨短杆菌突变株，直接发酵生产5′-肌苷酸，产率达20g/L。亦可采用产氨短杆菌突变株直接发酵高产 5′-黄苷酸，进而再由其他突变株或用酶法进一步将5′-黄苷酸转化为5′-鸟苷酸。 4、核酸类产品的生产菌种 ? 自然界的微生物都有合成核苷酸的能力。在正常