浙江大学生与物化学实验甲葡聚糖凝胶层析法分离混合物.pptVIP

葡聚糖凝胶层析法分离混合物 1、原理 凝胶层析：指混合物随流动相经过有凝胶颗粒作固定相的柱子时，混合物中各物质因分子大小不同而被分离的技术。又称为分子筛层析或排阻层析。 层析用的凝胶为不溶于水的化学惰性物质，离子基团含量少，颗粒大小均匀，网眼大小的选择范围宽广，机械硬度高等特点。 常用的有葡聚糖凝胶（Sephadex）、聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel）及琼脂糖凝胶（Sepharose）。 葡聚糖凝胶层析法分离混合物 葡聚糖凝胶是多聚葡聚糖和环氧氯丙烷相互交联形成的三维网状结构。见图1.1。通过控制二者的配比及交联时的反应条件，获得具有不同网眼（孔隙）的凝胶。 交联度越大，网眼越小；交联度越小，网眼越大。网眼（孔隙）的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围，一般从几百到数十万不等。 葡聚糖凝胶层析法分离混合物 进行凝胶层析时，选择合适的葡聚糖凝胶装柱，待分离的物质通过此柱时，它们相互之间由于分子量大小各不相同，在固定相上的阻滞作用有所差异，所以在柱中以不同的速率移动。 葡聚糖凝胶层析法分离混合物 即分子量大于允许进入凝胶“网眼”范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，只随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此阻滞作用小，流程短，先流出层析柱； 分子量很小的物质可完全涌入凝胶颗粒内部，阻滞作用大，流程长，移动速度慢，从层析柱中流出就较迟； 若物质分子量介于完全排阻物质