细胞原代培与养与传代.pptVIP

【注意事项】  1．本实验自始至终要严格进行无菌操作，不能抱有任何侥幸心理，器皿和器械一旦有污染的可能，要勤换或在酒精灯上勤烧烤。配液时所使用的三角瓶瓶口、吸管等都要注意在酒精灯上烧烤。 2．配制液体调试pH值时，要少量多次加入NaHC03，以免过量偏碱造成不必要的液体浪费。 3．待细胞分装到培养瓶后，要在瓶壁的上面做好标记，以便区分细胞的贴壁面，严防在细胞换液时培养液未覆盖到细胞面上，造成细胞干枯死亡。 4．实验操作前，净化台或无菌室要进行紫外灯照射消毒20分钟。 5．实验所用物品，要求全部进行无菌处理。 6．培养过程中要随时注意培养箱的温度，严格控制在37 ℃ ±0.5。 7．在细胞培养操作过程中，严禁说话。 8．培养细胞的冻存和复苏的全部过程，必须在无菌橱中和酒精灯上进行操作，否则容易发生污染，影响冻存质量，复苏后则不易成活。冻存的细胞在复苏时必须尽快融化，使之迅速通过细胞最易受损伤的-5℃～0℃，以防止冰晶的损伤。同时因冻存液中的DMSO对细胞有毒性作用，所以操作必须迅速。 酶标仪 微孔板震荡器 Culture flask Culture Plate 培养器皿 浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小时）、 流水冲洗、蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干 常用玻璃器皿清洗