推荐03-6 紫外-可见分光光度法应用.pptVIP

a)图：X、Y组份的最大吸收波长不重迭，相互不干扰， 可以按两个单一组份处理。 b)和c)图：X、Y相互干扰 此时可通过解联立方程组求得X和Y的浓度： 其中，X、Y组份在波长?1和?2处的摩尔吸光系数?可由已知浓度的X、Y纯溶液测得。解上述方程组可求得cx及cy。 此方法需要解联立方程，不但手续繁杂，而且误差也大，对于浑浊试样或其他背景吸收较大的试样，如生物组织液等，由于成分复杂和化学不均匀性，又存在很强的散射，一般很难找到合适的参比溶液来抵消影响。20年代初提出来双波长分光光度法。 组分增多，实验的误差将增大。 根据吸光度加合性，有 A1=A样1 + AS1 A2 =A样2+ AS2 ?A=( A2- A1)=(?2-?1) cb 试样的吸光度差与待测物质的浓度成正比，与背景吸收和散射光无关，即背景和散射光得到校正。 （三）双波长法分光光度法 1. 等吸收点法 当混合物的吸收曲线重迭时，如右下图所示，可用等吸收点法来测定。 具体做法：将 a 视为干扰组份，现要测定 b 组份。 a)?分别绘制各自的吸收曲线a, b； b)?画一平行于横轴的直线分别交于a组份曲线上两点，并与b组分相交； c)?以交于 a 上一点所对应的波长 ?1 为参比波长，另一点对应的为测量波长 ?2，并对混合液进行测量，得到： A1=A1a + A1b + A1s A2 =A2a + A2b + A2s 若两波长处的背景吸收相同，即A1s= A2s 二式相减，得，?A=(A2a- A1a)+( A2b- A1b) 由于 a 组份在两波长处的吸光度相等， 因此 ?A=( A2b- A1b)=(?2b-?1b)lcb 从中可求出cb 同理，可求出ca. 一般以被测组分X的最大吸收波长作为测定波长λ1，和干扰组分Y相交，从交点处画一平行于横轴的直线，取Y组份曲线上相交的另一点所对应的波长?2为参比波长，对混合液进行测量。 λ1- λ2 选择要求： ?A足够大， ?λ尽量小（提高测量精密度） 测苯酚：测量波长λ1，参比波长λ2 、λ2’（三氯苯酚和λ1 有相同吸收的点有两个λ2、 λ2’ ， λ2 和λ1间距小，精密度高 ），选择λ2 作为参比波长。 2. 系数倍率法 情况同上，但其中一干扰组份b在测量波长范围内无吸收峰时，或者说没有等吸收点时可采用该法。 具体做法：同前法可得到下式， A1=A1a + A1b A2 =A2a + A2b 两式分别乘以常数k1、k2并相减，得到， S=k2(A2a+A2b)-k1(A1a+A1b)=(k2A2b-k1A1b)+(k2A2a-k1A1a) 调节信号放大器，使之满足k2/k1=A1b/A2b，则 S=(k2A2a-k1A1a)=(k2?2-k1?1)lca 因此，差示信号S只与ca有关，从而求出ca. 同样可求出cb. （四）示差（差示）分光光度法 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，则A值很大，将产生较大的误差，需采用差示法。 即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 测量原理：以一浓度略小于试样组份浓度作参比， 具体做法：以浓度为cs的标准溶液调T=100%或A=0（调零） 所测得的试样吸光度实际就是上式中的?A，然后求出?c，则试样中该组份的浓度为(cs+?c)。 6. 导数光谱法 1）定义：将吸光度信号转化为对波长的导数信号的方法。导数光谱是解决干 扰物质与被测物光谱重叠，消除胶体等散射影响和背景吸收，提高 光谱分辨率的一种数据处理技术。 2）原理： 已知 ， 对波长求一阶导数，得 控制仪器使I0在整个波长范围内保持恒定，即dI0/d?=0，则 可见，一阶导数信号与浓度成正比。 同样可得到二阶、三阶….n 阶导数信号亦与浓度成正比。 随导数阶数的增加，峰形越来越尖锐，因而导数光谱法分辨率高（右图）。 吸收峰数为：导数阶数+1，即 n+1 10ppm苯的乙醇液 1ppm苯的乙醇液 0ppm纯乙醇 1ppm苯的乙醇溶液， 一阶导数光谱 基本光谱 1ppm苯的乙醇溶液， 四阶导数光谱 选 择 性 及 灵 敏 度 均 提 高 （苯的导数信号） 3）导数峰高测量方法 测量方法有三，如下图： 正切法：相邻峰(极大或极小)切线中点至相邻峰切线(极小或极大)的距离d； 峰谷法：两相邻峰值(极大或极小)间的距离p1或p