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RIA可(放射免疫测定)-研究生-6
放射免疫测定法（RIA） ——测定血清三碘甲状腺原氨酸（T3） 一、实验原理 *Ag + Ab→*Ag—Ab（ B ）+ *Ag（F） + Ag（未标记待测抗原） ↓ Ag—Ab + Ag B F B0 T 二、试剂材料 1、标准T3溶液： S0、S1 、 S2 、 S3 、 S4 、 S5 、 S6 —— 0、 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ng/ml。 2、125I-T3溶液：红色 3、T3抗血清：蓝色 4、免疫分离剂（ISR）：加样前必须摇匀。 5、T3质控血清（QC） 6、聚苯乙烯塑料试管（1×7cm）、 r-计数器等 三、操作方法 四、结果判断 1、计算结合百分率，结合百分率按下式计算： S1~S5（cpm）-NSB（cpm） B/Bo百分率=───────────×100％ So（cpm）-NSB（cpm） 2、绘制标准曲线： 以B/Bo百分率为纵座标，以T3标准浓度为横座标 在半对数座标纸绘画出标准曲线。根据待测样品 B/Bo百分率，可以从标准曲线上查得样品的T3 含量。参考值：0.9 ~2.2ng/ml 五、注意事项 1．冰干品溶解后应保存2 ~ 8℃条件下，不要反复冰融，否则活性下降。 2．所有试剂包括待测样品，分析前应在室温下平衡。在加分离试剂前，须充分摇匀。 3．固相二抗不得冷冻。 4．125I-T3溶液应避光保存。操作中应注意防护。废弃物应按国家有关规定存放。 5．严重溶血标本不能用；脂血会使结果偏高，宜空腹采血。 * * 250 250 50 50 25 QC2 10 50 T 2 50 50 25 U 11 250 250 250 250 50 50 S125 S1 4 50 50 S325 S3 6 50 50 S525 S5 8 250 50 50 25 QC1 9 250 50 50 S425 S4 7 250 50 50 S225 S2 5 250 50 50 S025 S0 3 250 50 50 S025 NSB 1 摇匀室温放置15min ISR 摇匀37℃温育 1 小时。 抗体 蒸馏水 125I-T3 样品 Qc 标准品 零标准 名称 编号 3500rpm离心20min，弃上清，测各管沉淀的放射性强度（cpm数） *
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