第二章节 杂交育种.pptVIP

三、杂交育种 改变代谢通路育种 改变自我代谢调节系统育种 五、防止菌株衰退的措施 菌种退化：菌种的发酵能力降低、繁殖能力降低、发酵产品的得率降低 1、衰退的可能原因 （1）、菌种回复突变或自发突变 （2）、菌种的生长要求没得到满足 （3）、控制产量的质粒脱落或与核DNA复制不一致 2、防止菌种衰退的方法 A、从菌种选育方面考虑 B、尽量减少传代次数（减小突变） C、创造良好的培养条件 D、采用有效的菌种保藏方法 1、选择冷冻保护剂，最常用的冷冻保护剂是二甲亚砜和甘油，最终使用浓度一般为甘油10％、二甲亚砜5％。 * * 四、基因工程育种 基因重组育种：是运用体外DNA各种操作或修改手法获得目的基因，再借助于病毒、细菌质粒或其他载体，将目的基因转移至新的宿主细胞并使其在新的宿主细胞系统内进行复制和表达，或者通过细胞间的相互作用，使一个细胞的优秀性状经其间遗传物质的交换而转移给另—个细胞的方法。 基因重组 １、获得待克隆的DNA片段（基因）； ２、目的基因与载体在体外连接； ３、重组DNA分子导入宿主细胞； ４、筛选、鉴定阳性重组子； ５、重组子的扩增与／或表达。 第三节、微生物菌种保藏 ◆目的 把微生物菌种资源在一定条件下保存，使其存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异，保持菌株原有培养特性和生理活性。 1、菌种保藏的目的及意义 ◆意义 菌种是国家的一种重要资源，保持优良菌种的优良性能，可保证高产稳产；在基础研究中，菌种保藏可保证研究结果获得良好的重复性； ◆原理 根据菌种的生理、生化特点，创造条件使菌种的代谢活动处于不活泼状态（休眠状态）。 2、菌种保藏基本原理及策略 ◆策略:保藏时首先要挑选优良纯种，最好是它们的休眠体（孢子、芽孢等），其次是有针对性的创造干燥、低温和隔绝空气、缺营养或添加保护剂的环境条件，使微生物细胞代谢处于低水平或几乎停止。 3、保藏机构 ? 国际重要菌种保藏机构 美国农业部农业研究服务部 ARS 武汉大学中国典型培养物保藏中心 CCTCC 中科院微生物所普通微生物菌种保藏管理中心 CCGMC 国立标准菌种保藏所，英国，伦敦 NCTC 真菌中心收藏所，荷兰，巴尔恩市 CBS 美国标准菌种保藏所，马里兰州，罗克维尔市 ATCC 名称 缩写 3、保藏机构 ? 中国一般保藏机构 l）普通微生物菌种保臧管理中心（CCGMC）； 中国科学院微生物研究所，北京（AS）：真菌，细菌。 中国科学院武汉病毒研究所，武汉（AL－IV）：病毒。 2）农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）； 中国农业科学院土壤肥料研究所， 3）工业微生物菌种保臧管理中心（CICC）； 轻工业部食品发酵工业科学研究所，北京。 4）医学微生物菌种保臧管理中心（CMCC）； 中国医学科学院皮肤病研究所，南京（ID）∶真菌。 卫生部药品生物制品检定所，北京：细菌。 中国医学科学院病毒研究所，北京：病毒。 5）抗生素菌种保藏管理中心（CACC）； 中圈医学科学院抗生素研究所，北京和四川抗生素工业研究所，成都：新抗生素菌种。 华北药厂抗生素研究所，石家庄：生产用抗生素菌种 6）兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）； 农业部兽医药品监察所，北京。 斜面传代法 穿刺法 液体石蜡法 甘油管法 砂土管保藏法 滤纸片保藏法 冷冻干燥保藏法 液氮冷冻法 4、保藏方法 暂时保藏法 长期保藏法 （定期移植低温） 把菌种接种到所需要的斜面培养基上，最适温度下培养，长出丰满的菌体细胞或孢子后，将试管口防水密封，置于4℃的冰箱或冷库中保藏。然后每隔一定时间重新移接一次，传代保藏。 移种时间因菌种不同而异， 几周到几个月不等。 ◆斜面传代保藏法 优点：方法简单、存活率高，具有一定的保藏效果。 缺点：菌种仍有一定的强度的代谢活动条件，保存时间不长，传代多，菌种容易变异。 适用菌种：细菌、酵母、放线菌、霉菌 1938年发明。 基本方法和原理：是在斜面培养或穿刺培养上加一层液体石蜡，液体石蜡可以防止失水干燥，隔绝空气，降低菌种细胞代谢速率。此法适用于各类微生物，尤其是不形成芽孢或孢子的真菌。 操作方法：?矿油灭菌； ? 菌种培养； ? 灌注矿物油； ?低温（4 ℃左右）保藏 ◆矿油（液体石蜡）保藏法 ◆沙土管保藏法 适用菌种：产孢子的微生物，如放线菌、芽孢细菌和某些真菌等，对于一些对干燥敏感的细菌（奈氏球菌、弧菌、假单胞杆菌）以及酵母不适用。 利用土壤颗粒对微生物起保护作用，提高微生物的存活率。其包括砂土制备和真空抽干两步。 首先把加一定保护剂的菌悬液冷冻，然后在减压情况下利用升华现象出去水分，使细胞的代谢、生理等生命活动处于停止状态下进行长期保存。 ◆真空冷冻干燥保藏法 特点： 它是菌种保藏中最有效的一种