弱直流电场对枯草芽孢杆菌生长和代谢活性的作用-应用化学.pdfVIP

第２９卷 第４期 应 用 化 学 Ｖｏｌ．２９Ｉｓｓ．４ ２０１２年４月 　　　　　　　ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　　　　　　　 Ａｐｒ．２０１２ 弱直流电场对枯草芽孢杆菌生长和代谢活性的作用 ａ ｂ 周生学 　马　洁 ａ ｂ （宁夏师范学院化学与化学工程学院　固原７５６０００；首都师范大学化学系　北京 １０００４８） 摘　要　枯草芽孢杆菌６３５０１（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ６３５０１）培养液在连续培养时分别通入不同强度的直流电场，研 究了它们在持续直流电刺激下的生长曲线、ｐＨ曲线、ＡＴＰ酶活性、胞内总蛋白含量、细胞膜通透性以及细菌微 观形态变化。结果表明，适宜的直流电能促进枯草芽孢杆菌增殖；枯草芽孢杆菌的 ＡＴＰ酶活性在 －３ ２ ００４５５×１０ Ａ／ｃｍ电流密度作用下，在对数生长前期、后期和稳定期分别比对照组同期提升１９、３５和３８ 倍，表明适宜强度的电流增强了细菌细胞的代谢活性。细菌通透性也有不同程度的提高，与透射电子显微镜 观察到的细菌细胞通电后的形态变化具有一致性。 关键词　直流电场，生长代谢，枯草芽孢杆菌，酶活性 中图分类号：Ｏ６４６　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００００５１８（２０１２）０４０４２２０６ ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１０９５．２０１２．００１９８ ［１］ 用电化学方法刺激微生物改变正常生长代谢的技术在微生物发酵、微生物冶金 、细菌快速检 ［２］ ［３５］ 测 、生物医药及微生物土壤修复等领域越来越受到人们的关注 。目前使用的通电培养方法是在微 生物培养液中通入微小直流电流，筛选得到对微生物细胞有利的电流刺激条件。这种方法对酵母菌的 ［６］ ［７］ 发酵物产量 及生物脱氮速率有明显提高；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ 研究表明，采用这种技术可以刺激细菌生长，并 ［８］ 将微生物的生长期延长３倍，同时大幅增加细菌数量，减少能耗。Ｓｈｅ等 研究了直流电场对细菌 Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｄｉｓｓｏｌｖｅｎｓ生长代谢的影响，认为１０ｍＡ是该菌生长的适宜电流，而电流大于１００ｍＡ则会 对细菌生长产生抑制作用。同时直流电对微生物细胞的抑制作用也有报道。这说明直流电场对微生物 作用机制复杂，如能掌握并利用这种机制，就能通过调控电流来调节微生物生长代谢，这在微生物工业 生产中具有重要意义。 Ｖａｌｌｅ等［３，９１０］研究了外电场条件下一些生物体生理指标的变化，由此探索了如胰岛素原等的生产 和分离方法，具有深刻意义。而枯草芽孢杆菌作为一种重要的工程菌株，在遗传学研究中广泛应用。目 前对其在弱电场下的生长代谢各项生理指标研究较少。作者对枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）６３５０１ 培养液外加不同弱直流电，比较了不同条件处理下细菌的生长代谢活性结果，并考察了其微观形态变化 的动力学行为，得到了较系统的实验结果，为进一步研究直流电场作用于细菌细胞的作用机制提供了 可靠的实验依据。 １　实验部分 １．１　试剂和仪器 ＳＯＮＩＣＳＶＣ６０５型超声细胞破碎仪（美国Ｓｏｎｉｃｓ公司）；ＨＩＴＡＣＨＩＨ７００型电子透射显微镜（日本日 ３Ｋ１５型德国西格玛台式高速冷冻离心机（德国Ｓｉｇｍａ公司）；ＶＭＰ３多通道电化学工作站（法 立公司）； 国ＢｉｏＬｏｇｉｃ公司）；７２１Ｂ型分光光度计（上海第三分析仪器厂）；ＭｉｌｌｉＱ超纯水处理器（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ 公司）；钛网对电极；ＡＴＰ酶活测试盒（南京建成生物工程研究所）；酵母浸粉、胰蛋白胨（北京双旋微