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遗 传 学 报，26(2):135-141,1999 ActaGeneticaSinica 外源基因在转基因小鼠中遗传 和表达的稳定性 张靖溥 劳为德 张旭晨 魏影允 刘 哗 中（国科学院发育生物学研究所 北京 100080) 摘要 通过显微注射将外源基因构件.1106牛（a-S1酪蛋白基因调控区指导的乙肝病毒表面 抗原基因表达构件）导人小鼠受精卵中，用PCR-Southern方法进行外源基因的整合检测、 ELISA法进行外源基因的表达检测，对4代转基因小鼠进行了跟踪测定。结果表明：原代转基 因小鼠的整合率为56%(17/30)，原代雌鼠乳汁中转基因产物的表达率为100%(8/8)；传代 跟踪考察证明，外源基因在转基因小鼠中可以稳定遗传并在后代中表达目标产物；但后代中 外源基因的整合率不符合 “单一位点随机整合”的假说，家系分析推测外源基因在受精卵中的 整合可能存在多位点整合机制；后代中外源基因的表达量有升高和降低的趋势，这可能与其 位置效应、拷贝数和遗传信息物质跨越代界时imprinting图式的改变相关。 关键词 转基因动物，随机整合，遗传，表达 分类号 0789 利用转基因动物技术研制乳腺生物反应器，生产珍稀蛋白和常规生产方法无法得到 的肤类药品已成为可能[1-61。然而，人们不仅期望外源基因能成功地在原代转基因动物的 乳汁中表达，而且期望此特性能在转基因动物家系中代代相传，“永久”地提供人类所需的 目的产品。为此，就需要考察转基因动物在传代过程中外源基因遗传和表达的稳定性。国 内外有关这方面的研究尚未见文献报道。在前期工作中我们已经实现了牛a-S1酪蛋白 基因B（ovinea-S1Caseingene)指导乙肝表面抗原H（BsAg）基因在羊个体中的表达[710 鉴于大家畜的生活周期较长，不便进行传代跟踪检测。为对该外源基因在转基因动物传 代过程中的遗传和表达的稳定性有所了解，我们以小鼠为模型，对此基因构件在转基因小 鼠中的传代和表达情况进行了初步考察。 1材料和方法 1.1材料 1.1.1外源基因表达构件 A106，为牛a-S1酪蛋白基因B（ovinea--S1Caseingene) 表达调控框架指导的乙肝病毒表面抗原 H（BsAg）基因表达的融合基因[71［0 pBluescriptKS-PCRsoo[CNI]-ayw质粒，为构建融合基因的中间质粒，含有乙肝病毒表面抗 本文于1997-06-11收到，1997-12-01修回 国家 “八五”攻关项 目项（目号：85-722-06-03) 136 遗 传 学 报 26卷 原基因7]［i 1.1.2试剂 随机引物标记试剂盒为Promega公司产品，a-P32_dATP购自辐瑞公司； PCRKit购 自上海生工公司；乙肝病毒表面抗原ELISA试剂盒购 自华美生物工程公司；尼 龙膜为HYBOND产品；其余化学试剂为国产分析纯试剂。 1.1.3 实验小鼠 昆明小鼠，由本所动物房提供。 1.2 方法 1.2.1基因操作 质粒和Lambda噬菌体DNA的提取，及一般基因操作按照文献 8［]进 行。小鼠基因组DNA的提取按照文献 9［1。外源基因的整合检测，采用PCR-Southern Blot方法：以质粒pBluescriptKS-PCRsoo[CN2]-ayvv为模板，PCR引物MD24和MD26来自 HBV的X基因区最保守的序列[10［1]0MD24:5CTGGATCCTGCGCGGGACGTC CTT-3eMD26:5-GTT CACGGTGGTCTCCAT-3。扩增产物长度为227bp。循环 条件：98C10min,5601lmin,721C40s,940Clmin,30个循环。以HBV的X基因227bp的 PCR产物为探针，用同位素a-P32_dATP和随机引物标记法标记DNA探针。PCR样品经 0.8%琼脂糖凝胶电泳、Southern转移到尼龙膜上，进行常规分子杂交。 1.2.2 转基因小鼠的产生和传代 将x.106构件经SalI内切酶和碱性磷酸酶处理后，由 电泳分离出完整的表达框架18.7kb片段，定量，注射基因浓度调为80-100个分子2p11 次。用常规显微注射技术将外源基因构件转人受