DN同A的生物合成.pptVIP

教学要求 1.掌握DNA生物合成的类型和其在种族延续及个体发育中的重要意义。 2.掌握DNA复制及其相关的基本概念，复制的特点，复制的体系的组成和基本过程。 3.自学DNA损伤的主要原因，了解常见的损伤类型和修复合成的机制。 4.熟悉逆转录和逆转录酶的概念和重要生物学意义。 第一节 DNA的复制 1. DNA复制的概念 2. DNA复制的意义 3. DNA复制的方式 4. DNA复制的体系组成 5. DNA复制的基本过程 6. DNA复制的高保真机制 一 . DNA复制的概念 DNA的生物合成包括DNA的复制， DNA的修复合成与逆转录三部分。DNA复制是DNA生物合成的中心内容，所谓DNA复制就是以DNA为模板指导合成全部DNA的过程。 二. DNA复制的意义 1. DNA是遗传信息的携带者 2. DNA复制是种系延续的关键 3. DNA复制是个体生长发育的关键 4. DNA变异与进化 5. DNA变异与疾病和退化 三 . DNA复制的方式 DNA 的复制方式是半保留复制： DNA 复制时，两条链打开分别作为模板，根据碱基互补的原则指导合成新链，如此合成的子代 DNA 分子与亲代完全相同，子代DNA 分子中的两条链一条来自亲代，另一条是新合成的， DNA 的这种复制方式称为DNA 的半保留复制。 半保留复制的证明 四. DNA复制的体系组成 1. DNA模板 2. DNA聚合酶等多种催化酶 3. RNA引物与引物酶 4. 连接酶 5. DNA合成的原料：四种dNTP 6. 蛋白因子 7. 无机离子（Mg 2+等）和反应体系 8. 供能体系 1. DNA模板 ①DNA结构特点 ②解链酶（Helicase） ③拓扑异构（Topoisomerase） ④单链结合蛋白（Single strand binding protein） DNA聚合酶－基本特征 ①模板的依赖性 ②方向的单向性 ③引物的依赖性 ④校读功能 ⑤底物的特异性 ⑥合成速度 DNA合成方向的单向性 3. RNA引物与引物酶 ①以DNA为模板的 RNA聚合酶 ②合成的RNA片段称 为引物 ③引物能够提供核苷 　酸 片段的３’－OH ④引物酶是引发体的 　重要结构成分 ⑤具有RNA聚合酶的 基本特征 4. 连接酶 ①连接酶只能催 　化互补双链的 　连接 ②连接酶不能催　 化游离单链的 　连接 ③连接酶是重要 　工具酶 5. 其他成分 4. DNA合成的原料：四种dNTP. DNA聚合酶底物的特异性 5. 蛋白因子: 多种蛋白因子 6. 无机离子（Mg 2+等） Mg 2+ 是DNA聚合酶的激活剂 7. 供能体系: ATP 五 .DNA复制的基本过程 1.复制的起始： 2.复制的延伸： 3.复制的终止： 1. 复制的起始 1.复制起始点 2.解为单链 3.合成引物 4.复制起始 ⑴ 复制的起始点 原核生物从一个固定的起始点开始，同时向两个方向进行的，称为双向复制 原核生物细胞有单个起始点 真核生物有多个起始点 2. 复制的延伸 1. 前导链与随从链 2. 冈崎片段 3. 引物的水解与连接 ⑴. 前导链与随从链 1. 在DNA复制过程中，与复制叉行进方向相同连续合成的新的DNA单链称之为前导链。 2. 在DNA复制过程中，与复制叉行进方向相反不连续断续合成的新的DNA单链称之为随从链。 (2). 冈崎片段 在DNA复制时，与前导链的连续合成不同随从链的DNA合成是不连续的。这种不连续合成随从链上由RNA引物和新合成DNA片段共同组成的片段称之为冈崎片段。因这种现象是由日本学者冈崎（Okazaki)首先发现的故命名为冈崎片段（Okazaki fragment) 。 (3). 引物的水解与连接 3. 复制的终止 1.水解引物 2.填补空缺 3.连接DNA片段 六.DNA复制的高保真机制 1. 复制时严格的碱基互补原则 2. DNA聚合酶的校读功能 3. DNA损伤的修复能力 DNA复制与PCR 聚合酶链式反应(polymorase chain reaction,PCR)是一种在体外由引物介导的DNA酶促合成反应，也叫基因扩增技术,类似体内的DNA复制过程。PCR主要是利用DNA聚合酶依赖DNA模板的特性，在一对引物间诱发聚合酶反应。 PCR具有特异性强，灵敏性高，操作简便，对待检材料质量要求低等特点，能够快速扩增任何目的基因片段。 开展PCR的基本要素 1.基因组(DNA)模板 2.引物 3.DNA聚合酶 4.合成原料dNTP 5.二价镁离子 Mg++ 6.一价离子K+ 7.适合的缓冲液 目的基因扩增片段的鉴定 第二节 DNA的修