小鼠血清中内源性代谢物的GC／TOF-MS分析.pdfVIP

Vo1．33 高 等 学 校 化 学 学报 NO．6 2012年 6月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES l】88 ～1194 小鼠血清 中内源性代谢物的GC／TOF-MS分析 吴胜明 ，封 波 ，程建华 ，李海静 ，方均建 ，颜贤忠 ，魏 来 ，董方霆 (1．国家生物医学分析中心，北京 100850；2．北京大学人民医院肝病研究所 ，北京 100044) 摘要 采用气相色谱 ／飞行时间质谱 (GC／TOF—MS)联用仪建立了小鼠血清的代谢组学分析方法．通过对硅 烷化试剂的优化和去卷积分析 ，共检测到269个峰，其中相似度在800以上的代谢产物有46个；以核糖醇 为内标，任意选取 18种内源性代谢产物考察此方法的精密度和稳定性 ，并通过 14种标准氨基酸的混标溶液 进行定量分析考察本方法的线性关系．结果表明，14种氨基酸在 2．78—113．20rig／L浓度范围内线性关系 良好；18种内源性代谢产物的变异系数均在 15％以内，具有较好的稳定性；并利用8种标准单糖 ，通过肟化 反应解决了糖在多个位置出峰的难点．该方法可用于代谢组学研究，并通过相关数据处理找出生物标志物， 为疾病诊断提供了新的思路． 关键词 气相色谱／飞行时间质谱；肟化；硅烷化；代谢组学 中图分类号 0657 文献标识码 A DOI：10．3969／j．issn．0251-0790．2012．06．013 代谢组学是研究生物体 自身生理病理状态和生物体对外源性物质的生化效应的有力手段，不仅可 以研究代谢产物浓度的变化，还可研究分子的动态信息，从时间和空间上整体评价生物效应，是将时 间和空间相联系起来综合研究的整体方法．自1999年 Nieholson等 ¨提出代谢组学 (Metabonomics)的 概念后，该领域的研究迅速发展，成为全球关注的新热点之一，并在毒理学 、疾病诊断 以及 中医药现代化 H等领域得到了广泛应用．基于代谢组学的研究 目的和对象，为表征尽可能多的代谢 物，有必要发展一种能够检测尽可能多的代谢产物的分析方法，并结合模式识别法等数据分析手段， 发现数据问的定性及定量关系，找到引起差异的目标代谢产物，阐明数据中蕴藏的生物学意义及其与 机体代谢的关系．目前，代谢组学的研究方法主要有核磁共振 (NMR)、色谱及其与质谱 (MS)联用技 术(LC．MS和GC．MS)、红外光谱 (IR)和毛细管电泳(CE)等，其中以NMR和MS最为常用．NMR技术 已广泛应用于代谢组学研究，其优势主要在于样品前处理简单，对样品无损性、无选择性．但与MS相 比，该方法灵敏度低且分辨率不高，有可能漏掉某些真正起作用而含量甚微的化合物信息；而 MS技 术具有高灵敏度、高分辨率和高专属性，随着质谱及联用技术的发展，其在代谢组学中的应用将倍受 关注 H]． 本文建立了以气相色谱／飞行时间质谱 (GC／TOF—MS)技术为基础的小鼠血清的代谢组学的研究方 法，为血清代谢组学的研究提供一种新的方法和思路． 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 GC／TOF—MS系统 由HP6890型气相色谱 (美 国Agilent技术公司)和飞行时间质谱仪 (美 国Waters 公司)组成，配备MassLynx工作站和NIST质谱数据库；DB-5气相色谱柱 (柱长30m，直径0．25nm， 壁厚0．25 m，美国Agilent公司)；EppendorfMiniSpinPlus离心机和Eppendorf5810R离心机均购 自 德国Eppendorf公司；ZHWY—IOOB气浴恒温摇床购 自上海智城分析仪器制造有限公司；DSHZ-300A水 收稿 日期：2011-06-29． 基金项 目：国家科技部创新方法工作专项(批准号：2009IM031700)、国家自然科学基金 (批准号、重大传染病专项(批 准号：2008ZX10002-016)和国家 自然科学基金 (批准号资助． 联系人简介：吴胜明，男，实验师，主要从事代谢组学研究．E-mail：wsmwyk@163．con 董方霆，女，研究员，主要从事药物分析与代谢组学研究．E—mail：dfi@pro