转录介导扩增技术检测慢性丙型肝炎患者血清中HCV RNA及与RT-PCR的比较.pdfVIP

中南大学学报（医学版） 2014, 39(7) 664 J Cent South Univ (Med Sci) DOI: 10.11817/j.issn.1672-7347.2014.07.003 /xbwk/fileup/PDF/201407664.pdf 转录介导扩增技术检测慢性丙型肝炎患者血清中 - HCV RNA及与RT PCR的比较 1 1 2 2 1 吴大先 ，刘菲 ，刘洪波 ，戴立忠 ，谭德明 （1. 中南大学湘雅医院感染病科，病毒性肝炎湖南省重点实验室，长沙 410008； 2. 湖南圣湘生物科技有限公司，长沙 410205) [ 摘要 ] 目的 ：利用转录介导的扩增技术 (transcription mediated amplification ，TMA) 扩增 HCV RNA ，并与 实时荧光定量反转录聚合酶链反应 (real-time reverse transcription polymerase chain reaction ，RT-PCR) 进行比较， 探讨 TMA 系统的稳定性及其与 RT-PCR 的灵敏性差异和相关性，以及 TMA 临床应用的意义。方法 ： 利用鼠白 血病反转录酶 (moloney murine leukemia virus ，MMLV) 、T7 RNA 聚合酶及 2 条特异性引物等建立 TMA 扩增体系； 通过 HCV RNA 的扩增曲线的相关性变化，评价不同储存温度对 TMA 扩增体系的稳定性和重复性的影响；通 过扩增一组 10 倍梯度稀释的 HCV RNA 体外转录样本，评价 TMA 体系与 RT-PCR 的灵敏性差异。收集 101 份 临床诊断为慢性丙型肝炎患者的血清，同时采用 TMA 试剂和 RT-PCR 试剂进行检测，比较两种方法的阳性检 出率，并利用直线相关和回归探讨两种方法检测血清 HCV RNA 的相关性。结果：成功地建立了 TMA 扩增体系， 该体系在室温下放置 24 h ，结果影响较大，但在 4 ℃储存 6 d ，-20 ℃下储存 6 个月内扩增效果不受影响，稳定 性良好。与湖南圣湘生物技术公司 RT-PCR 试剂检测结果的比较显示：31 份血清标本 TMA 及 RT-PCR 均检测 到阳性 20 例，阴性 11 例，检测一致率为 100%。选取其中 20 例阳性标本进行定量分析，发现两种技术有很好 r P 的相关性 ( =0.91 ， 0.01) 。与上海科华公司的 RT-PCR 试剂检测结果比较，发现在 70 份血清标本中，TMA 检 出 RNA 阳性标本数为 34 例，阴性标本数为 36 例，PCR 检出 RNA 阳性标本数为 32 例，阴性标本数为 38 例， 检测一致率为 97.1% ，两种检测方法阳性检出率差异无统计学意义 (P 0.05) 。对其中 29 例 PCR 检测和 TMA 检 r P 测均有定量结果的血清进行分析，两种技术也有很好的相关性 ( =0.96 ， 0.01) 。结论 ：TMA 检测试剂在 -20 ℃ 下储存，6 个月内稳定性和重复性良好。TMA 与 RT-PCR 均能很好地检出血清