碧云天P0013B RIPA裂解液 说明书.pdfVIP

RIPA裂解液(强) 产品编号 产品名称 包装 P0013B RIPA裂解液(强) 100ml 产品简介：  碧云天生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用 于常规的Western 、IP等。  RIPA 的本意是Radio Immunoprecipitation Assay 。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、 中、弱三类。关于不同的RIPA裂解液以及碧云天生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们 的相关网页：/lysis-buffer.htm 。  RIPA裂解液(强) 的主要成分为50mM Tris (pH 7.4) ，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS， 以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA ，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。  用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P00 12/ P0012S)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 P0013B RIPA裂解液(强) 100ml — 说明书 1份 保存条件： -20 ℃保存，一年有效。 注意事项：  为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。  需自备PMSF 。PMSF(ST506)可以向碧云天订购。  裂解样品的所有步骤都需在冰上或4 ℃进行。  关于裂解液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：/lysis-buffer.htm 选择合适的裂解液；另 一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 对于培养细胞样品： 1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS 、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗) 。按照6 孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2 秒后，细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解 液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/ 管，然后再裂解。 3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE 、Western和免疫沉淀等操作。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量 到200微升或250微升。 对于组织样品： 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM。 3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高 浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE 、Western和免疫沉淀等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上 清