用quot;增强子陷阱quot;技术构造并筛选果蝇UASGAL4系统中GAL4新品系和脑基因表达图谱数据库的开发.pdfVIP

Rapid P删豢瓣‰…洳 www．pibb．ac．cn 用“增强子陷阱技术构造并筛选果蝇 UAS／GAL4系统中GAL4新品系及 脑基因表达图谱数据库的开发 刘晓隽+袁小京’孙侃’ 帅秫春‘宋庆轩‘王磊+ 邵丽莎‘赵昕宇‘ 吕义晟’ 吕玉兵‘王连章‘钟毅” (清华大学生物科学与技术系，北京]00084) 摘要 “增强子陷阱”技术是建立果蝇脑全基因组表达图谱及其数据库的重要方法．筛选获得新特异表达的GAlA品系，可 为进一步研究果蝇脑神经在学习记忆功能提供强有力的基因工具．通过“增强子陷阱”技术来获得果蝇突变体，并与报告转 基凶果蝇(UAS．EGFP)杂交，用荧光显微镜观察成年果蝇脑内荧光分布，从而获得该突变体的脑基因表达图谱，在此基础上 677种，大部分在果蝇脑中有表达，其中在 利用JavaScript来建立果蝇脑全基因组表达数据库．目前获得基因突变体果蝇2 果蝇嗅觉学习记忆相关脑区蘑菇体表达的基因有368个，且有部分基因特异地表达在某些传导通路上．这些果蝇基因突变体 库及其表达图谱为进一步研究各基因的功能及作为遗传工具来研究各脑区结构和功能提供极人方便． 关键词增强子陷阱，突变体文库，报告转基因果蝇，蘑菇体，表达图谱 学科分类号Q189 果蝇作为一种经典的模式生物，其神经系统结 构相对简单．同时由于其基因在进化上的保守性及 遗传和分子生物学操作的优势，已被广泛用于神经 系统生理和病理研列l2】．目前许多研究表明，与 哺乳动物类似，果蝇神经系统通过不同的特化区域 分别行使不同生理功能．例如蘑菇体和中心体分别 对果蝇嗅觉和视觉相关的学习记忆有重要作用f3-o1． 因此筛选在这些特异部位表达的Gal4品系对进一 步研究这些部位神经功能具有重要意义． 我们利用果蝇自身的一种转座子——P因子携 带Gal4基因在果蝇的基因组中自由跳转[03，产生了 2677种不同的果蝇P因子插入突变品系．如果该 品系的P因子位于某未知基因的增强子附近，则P 因子携带的Gal4基因表达被增强子激活【7’8】．其产 物结合到上游激活序列(UAS)，使下游的报告基 因——增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreen Gai4·UAS Fig．1 systemtz fluorescent protein，EGFP)表达，从而标记出某未 ·共同第一作者． 知Gal4品系突变基因的表达部位【s~·q(图1)． 收稿日期：2008．04。18，接受口期：2008—05．15 万方数据 ·646· 生物化学与生物物理进展Prog．Biochem．Biophys． 2008；35(6) 座酶基因后，P因子在基因组中发生一次随机跳 1 材料和方法 转，再通过杂交去除转座酶基因，则P因子不再跳 1．1 P因子插入突变体的构建 转，从而产生稳定的P因子插入突变体(图2)· P因子转座需要转座酶，通过杂交方法引入转 Cross I d：w／；“；D啦一3舢／×早：w；sp／C妙c12；“ Cross II × a：wp；+／cyo-c12；+／DrA2—3早：yfx“x／；+／+；+“ ／